赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒（RGNNV) 核酸檢測(cè)試劑盒（一管式恒溫?zé)晒夥ǎ┦褂谜f(shuō)明書(shū)

赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒（RGNNV)  核酸檢測(cè)試劑盒（一管式恒溫?zé)晒夥ǎ?/P>

◆ 產(chǎn)品說(shuō)明

動(dòng)物疫病檢測(cè)系列基于獨(dú)特的恒溫?zé)晒鈾z測(cè)技術(shù)，可針對(duì)食品、動(dòng)物組織等樣品中病毒的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于對(duì)赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒（RGNNV)的檢測(cè)，檢出限為10³copies/μl基因組RNA。

◆ 產(chǎn)品組成（ 48測(cè)試）

◆ 適用儀器

Dhelix-C、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308C等恒溫?zé)晒鈾z測(cè)儀，ABI 7500，LightCycler480，CFX 96等熒光PCR儀。

◆ 自備耗材和儀器

①滅菌1.5mL或2.0mL離心管；②冰盒；③移液器（0.1-2.5μL，0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；④離心機(jī)；⑤渦旋混勻器；⑥金屬浴

◆ 注意事項(xiàng)

1．本試劑檢測(cè)靈敏度高。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。

   1）第一區(qū)：樣本制備區(qū)。

 2）第二區(qū)：模板添加區(qū)。

   3）第三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。

★分區(qū)之間最好進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨(dú)立使用工具，需更換手套和實(shí)驗(yàn)服。

3．嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求在冰盒上操作。

4．反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心30秒。

5．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開(kāi)蓋易造成氣溶膠污染，禁止開(kāi)蓋。

6．不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

◆ 樣品處理

參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)處理樣品，制備的樣本保存待用。

詳細(xì)步驟請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作或查閱食安通軟件。

◆ 實(shí)驗(yàn)操作

1. 模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套水生動(dòng)物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過(guò)程詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。

2．添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）

     取出所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管，將試劑完全解凍，解凍后打開(kāi)管蓋向各管管底分別加入0.8 μL B-I及0.2μL R-I，蓋上管蓋離心1 min。打開(kāi)管蓋分別沿各管管壁上加入2μL模板，順序?yàn)镹G-I、待測(cè)樣品模板、PG- RGNNV -I。蓋好PCR管蓋后，離心3 min，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

3. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）

①恒溫儀器63℃條件下反應(yīng)45 min。

②若使用熒光定量PCR儀，則熒光基團(tuán)選擇FAM，淬滅基團(tuán)選擇None，將63℃ 15 s，63℃ 45 s作為一個(gè)循環(huán)，于63℃ 45 s處收集熒光信號(hào)，45個(gè)循環(huán)。

其他儀器請(qǐng)參照儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行設(shè)置。

◆ 結(jié)果判定

①儀器自動(dòng)判定結(jié)果，若顯示“陽(yáng)性”，則樣品中含有赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒（RGNNV)；若顯示“陰性”，則樣品中不含有對(duì)赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒（RGNNV)或含量低于檢出限。如在40min~45min間出現(xiàn)曲線上揚(yáng)而自動(dòng)判讀結(jié)果為陰性，可能由于樣品含量較低導(dǎo)致，建議對(duì)樣品進(jìn)行富集或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間至60min進(jìn)行復(fù)核。

②在熒光定量PCR儀上，根據(jù)有無(wú)“S”型擴(kuò)增曲線判定結(jié)果。若有“S”型擴(kuò)增曲線，則樣品中含有赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒（RGNNV)；若無(wú)“S”型擴(kuò)增曲線，則樣品中不含有赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒（RGNNV)或含量低于檢測(cè)限。

• NG反應(yīng)管結(jié)果顯示“陰性”，PG反應(yīng)管結(jié)果顯示“陽(yáng)性”，此次檢測(cè)結(jié)果有效，否則無(wú)效。如重復(fù)檢測(cè)結(jié)果仍為無(wú)效，請(qǐng)與技術(shù)支持人員聯(lián)系。
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