諾如病毒GI型、GII型RNA核酸檢測試劑盒(IAC，一管式PCR-熒光探針法)使用說明

諾如病毒GI型、GII型^RNA核酸檢測試劑盒（IAC，一管式PCR-熒光探針法）

◆ 產品說明

 諾如病毒GI型、GII型^RNA核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）參照GB 4789.42-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 諾如病毒檢驗》進行設計，可于一個反應中同時檢測GI型、GII型諾如病毒；適用于貝類生，食蔬菜，胡蘿卜、瓜、堅果等硬質表面食品，草莓、西紅柿、葡萄等軟質水果等食品中GI型、GII型諾如病毒核酸的檢測。

◆ 產品組成（48測試）

◆ 適用儀器

   ABI 系列、MJ 系列、Roche 系列、博日系列以及其它熒光定量PCR 檢測儀（可同時檢測FAM通道（494 nm）、VIC通道（538nm）兩種通道的熒光定量PCR儀）。

◆ 自備耗材和儀器

    ①冰盒；②移液器（1-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭（RNase free）；③離心機；④渦旋混勻器。

◆ 注意事項

1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區操作。

   1）第一區：試劑準備區。

   2）第二區：樣本制備區。

   3）第三區：擴增及產物分析區。

   ★ 分區之間最好進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2. 實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，使用移液器，試驗產生的所有廢棄物及時處理。

3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰上操作。

4．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。試劑使用前剪下所需的測試數，解凍后使用前離心30秒。

5．反應結束后，擴增管請置于密封袋內丟棄，當日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內使用。

◆ 試劑盒組分及樣品處理說明

（1）樣品前處理請參照GB 4789.42-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 諾如病毒檢驗》進行樣品前處理。

（2）A-GIGII為GI、GII反應液，含有諾如病毒GIGII型引物探針。

（3）IAC-Nor為過程控制反應液，含有過程控制病毒引物探針。

（4）B-Nor為提取過程控制液，進行樣品RNA提取時請參照國標法加入10 μL B-Nor作為提取過程控制；亦可參照國標法另取50-100 μL B-Nor，用PBS緩沖液補足至200 μL，進行核酸提取、標準曲線制作及計算提取效率。

（5）NG-Nor為陰性對照，也可參照國標法提取陰性樣品核酸作為陰性對照進行實驗。

（6）PG-Nor含GI型、GII型諾如病毒核酸，可作為陽性對照，亦可參照國標法作為擴增控制計算抑制指數。

*推薦使用我們公司的病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒中的方案進行病毒RNA的提取，或者采用其他等效產品進行RNA提取。

◆ 實驗操作（推薦）

1. 反應體系配制：（樣本制備區）

剪下所需測試數的已含有反應液的PCR管，并參照下表進行編號，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，使用穿刺加樣法穿過固封層向每管反應液中分別加入模板。

配制完成后請蓋上PCR管蓋，渦旋混勻并離心后上機反應。

*請參照上表對管進行編號，以免混淆。

2. 擴增反應（擴增及產物分析區）

使用熒光定量PCR儀進行檢測，編號A～B，H～L使用FAM和VIC通道，編號C～G使用FAM通道。

按下列條件設置擴增反應：

其他儀器請參照儀器說明書進行設置。

◆ 結果判定

1. 實驗有效性判定：

（1）實驗滿足：空白對照陰性（A反應孔)；陰性對照陰性（B反應孔）；陽性對照（J反應孔）陽性；否則本次實驗無效，請與本公司技術支持聯系。

（2）過程控制（C~G反應孔）需滿足：提取效率≥1%；如提取效率＜1%，需重新檢測；但如提取效率＜1%，檢測結果為陽性，也可酌情判定為陽性。

（3）擴增控制（H~J反應孔）需滿足：抑制指數＜2.00；如抑制指數≥2.00，需比較10倍稀釋食品樣品的抑制指數；如 10 倍稀釋食品樣品擴增的抑制指數＜2.00，則擴增有效，且需采用10倍稀釋食品樣品RNA的Ct 值作為結果；10倍稀釋食品樣品擴增的抑制指數也≥2.00時，擴增可能無效，需要重新檢測；但如抑制指數≥2.00，檢測結果為陽性，也可酌情判定為陽性。

2. 結果判定

待測樣品的Ct值大于等于45時，判定為諾如病毒陰性；待測樣品的Ct值小于等于38時，判定為諾如病毒陽性；待測樣品的Ct值大于38，小于45時，應重新檢測；重新檢測結果大于等于45時，判定為諾如病毒陰性；小于等于38時，判定為諾如病毒陽性。