中藥材中黃曲霉毒素檢測方案—HPLC（藥典方法）

黃曲霉毒素是一類真菌（如黃曲霉和寄生曲霉）的有毒的代謝產(chǎn)物，它們具有很強(qiáng)的致癌性，主要存在于藥材、谷物、堅果、棉籽以及動物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。其毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氰化物、砷化物和有機(jī)農(nóng)藥的毒性，其中以B₁毒性最大。當(dāng)人攝入量大時，可發(fā)生急性中毒，出現(xiàn)急性肝炎、出血性壞死、肝細(xì)胞脂肪變性和膽管增生。當(dāng)微量持續(xù)攝入，可造成慢性中毒，生長障礙，引起纖維性病變，致使纖維組織增生。

 

近年來，各級食品藥品監(jiān)管部門不斷加大中藥生產(chǎn)流通監(jiān)管力度，努力保持中藥質(zhì)量總體穩(wěn)定。

國家食品藥品監(jiān)督管理局關(guān)于規(guī)范中藥生產(chǎn)經(jīng)營秩序嚴(yán)厲查處違法違規(guī)行為的通知（國食藥監(jiān)安[2012]187號中，要求加強(qiáng)對重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留、黃曲霉毒素等安全性指標(biāo)的檢測和控制，切實保證中藥材質(zhì)量和安全，另要求企業(yè)具備與生產(chǎn)品種相適應(yīng)的檢驗設(shè)備和能力，嚴(yán)把質(zhì)量檢驗關(guān)。

《國家藥品安全“十二五”規(guī)劃》，規(guī)劃中明確提出“開展藥品快速檢驗技術(shù)研究，搭建檢驗技術(shù)共享平臺”、“加快推進(jìn)藥品快速檢驗技術(shù)在基層的應(yīng)用，配置快速檢驗設(shè)備”、“加強(qiáng)縣級機(jī)構(gòu)快速檢驗?zāi)芰�建設(shè)”的要求

                      
中藥中黃曲霉毒素的檢測方法：

2010版《藥典》附錄IX V 黃曲霉毒素測定采用高效液相色譜法，另外增補(bǔ)藥典描述該法檢測建立增加柱后光化學(xué)衍生法。

華安麥科作為國內(nèi)最早從事霉菌毒素檢測研究的高新技術(shù)企業(yè)對黃曲霉毒素檢測也有深刻的探索研究，下面就我們的實踐和大家分享一下，免疫親和柱-高效液相色譜法-柱后光化學(xué)衍生等內(nèi)容。

 

樣品經(jīng)甲醇-水提取，提取液經(jīng)過濾、稀釋，濾液經(jīng)過含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和柱層析凈化，黃曲霉毒素交聯(lián)在層析介質(zhì)中的抗體上，此抗體對黃曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂具有專一性，用水將免疫親和柱上雜質(zhì)除去，以甲醇通過免疫親和柱洗脫，再經(jīng)光化學(xué)衍生器柱后衍生，以提高檢測準(zhǔn)確性。

ToxinFast^®氣控操作架：含氣泵

ToxinFast^®玻璃微纖維濾紙 ：直徑11cm、孔徑1.5µm

ToxinFast^®玻璃試管：直徑12mm，長75mm，無熒光特性

ToxinFast^®注射器：10ml、20ml

 

樣品粉碎——提取——洗脫液進(jìn)樣、親和柱凈化——化學(xué)衍生——檢測數(shù)值（做過液相的都知道這些步驟的，在這里就簡單提一下，主要是為什么用到氣控操作架和化學(xué)衍生器在下面解釋一下！）

在樣品粉碎后需要過親和柱凈化，也就是怎么方便親和柱使用操作的問題，氣控操作架能有效地提高這個環(huán)節(jié)的工作效率（很方便操作的），如圖示：

1 連接組裝好的氣控操作架，將免疫親和柱、注射器針筒與氣控操作架連接，如圖所示；

     

      

2 將處理后的溶液上樣；

 

 

3 調(diào)節(jié)空氣泵旋鈕以控制流速，使樣液以1-2d/s的速度流出；

4，待樣液完全排干，用去離子水或蒸餾水以2-3d/s的流速洗滌兩次，每次10ml；

5，待液體完全排干，將樣品瓶置于親和柱下方，上樣1ml甲醇以1d/s的速度流出至完全排干。

以上操作步驟是用免疫親和柱--高效液相法檢測中藥中黃曲霉毒素的必經(jīng)步驟，如使用氣控操作架就能很好的固定親和柱并以可控流速操作，既高效也能使操作誤差減到最小。

華安麥科ToxinFast^®氣控操作架具有6支可控支流，能同時有效檢測多個樣本，還適用于

1ml和3ml多種規(guī)格免疫親和柱。

 

由于黃曲霉具有較強(qiáng)的紫外吸收和產(chǎn)生熒光的特性，因此可以進(jìn)行HPLC-紫外或熒光檢測，但是同時黃曲霉毒素中的B₁、G₁由于其在含水的流動相中容易產(chǎn)生熒光淬滅，因此在很多的實驗中都會采用衍生法測定黃曲霉毒素。

衍生的方法也很多：有柱前的，柱后的，在線的，由于在線的柱后光化學(xué)衍生有明顯的優(yōu)勢，所以現(xiàn)在被增補(bǔ)為藥典的檢測方法，優(yōu)勢主要在于（無需任何化學(xué)試劑、對人員無傷害；無需人員直接操作、避免誤差; 無需擔(dān)心衍生液腐蝕檢測器）

大家看完上圖肯定也能感受到在線光化學(xué)衍生的效果，希望這個分享可以給大家做黃曲霉毒素檢測時提供小小的幫助。