細(xì)胞支原體高靈敏檢測(cè)方法

細(xì)胞支原體污染
支原體無細(xì)胞壁，大小僅 0.1 - 0.3 μm，可穿透常規(guī)的 0.22μm 濾膜，常規(guī)過濾除菌的手段對(duì)支原體無效，難以阻擋。

細(xì)胞支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域普遍且比較棘手的問題，科研實(shí)驗(yàn)室和生物制藥行業(yè)均存在較高污染比例。對(duì)細(xì)胞而言，支原體會(huì)掠奪培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢甚至停止，還會(huì)破壞細(xì)胞膜完整性，影響細(xì)胞的正常代謝與功能。

支原體污染隱蔽性強(qiáng)、危害大、防控難度高，讓很多研究者頭痛不已。細(xì)胞支原體污染比例居高不，有些實(shí)驗(yàn)室支原體污染的平均比例可達(dá) 30%-60%。且傳代次數(shù)越多的細(xì)胞，污染概率越高。新引進(jìn)的細(xì)胞系若未經(jīng)過嚴(yán)格篩查，很容易成為支原體的污染源；生物制藥領(lǐng)域里一些動(dòng)物源性原材料常攜帶支原體，使得生產(chǎn)環(huán)節(jié)中的細(xì)胞體系也面臨很高的支原體的污染風(fēng)險(xiǎn)。

支原體污染初期不會(huì)引起培養(yǎng)基渾濁、變色等明顯異常，外觀上也無明顯變化，很容易被忽視。污染細(xì)胞在市場(chǎng)流通，同時(shí)培養(yǎng)基、血清、移液槍頭等試劑耗材滅菌不嚴(yán)格，以及實(shí)驗(yàn)人員操作不規(guī)范等，都為支原體污染提供了可乘之機(jī)。支原體可通過空氣、氣溶膠、接觸等多種方式傳播，一些生物實(shí)驗(yàn)用儀器，如超凈工作臺(tái)、離心機(jī)、培養(yǎng)箱、實(shí)驗(yàn)槍頭和試管架等都可能成為傳播媒介。一旦出現(xiàn)污染，若未及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理，極易擴(kuò)散至整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞培養(yǎng)體系，而且很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)無法清除，浪費(fèi)了時(shí)間和人力、物力，帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。

細(xì)胞支原體高靈敏檢測(cè)
支原體污染會(huì)改變宿主細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能，致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定，須對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞定期進(jìn)行支原體檢測(cè)。當(dāng)前的支原體檢測(cè)方法，存在檢測(cè)滯后性。傳統(tǒng)檢測(cè)方法如分離培養(yǎng)法耗時(shí)長(zhǎng)達(dá)數(shù)周，難以快速排查污染。由于污染初期無明顯特征，往往等到細(xì)胞出現(xiàn)異常時(shí)，污染已擴(kuò)散，清除難度大。

翼和生物高靈敏支原體檢測(cè)試劑盒采用多套引物探針在FAM通道檢測(cè)支原體DNA，采用一套引物探針在VIC通道（有些儀器是HEX通道）檢測(cè)內(nèi)參DNA，參照 EP 2.6.7 和 JP XVII 支原體檢測(cè)相關(guān)要求進(jìn)行驗(yàn)證；檢測(cè)對(duì)象為細(xì)胞培養(yǎng)的上清液，細(xì)胞沉淀或其他生物制品。

該試劑盒需要配合推薦使用的核酸抽提方案，檢測(cè)靈敏度達(dá)到10 CFU/mL。檢測(cè)結(jié)果可靠：抽提加入內(nèi)標(biāo)核酸，全過程質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定：全程閉管操作，無交叉污染。操作方便：操作簡(jiǎn)單，無需電泳步驟。