TriiZol高效總RNA抽提試劑的適用范圍及使用方法
TriiZol基本知識
產(chǎn)品簡介
TriiZol是一種用于細胞或組織總RNA抽提的試劑。它采用與Invitrogen公司的TRIzol完全相似的原理和方法，抽提的方法和步驟完全相同。TriiZol的顏色和TRIzol相同，加入氯仿后上層呈無色，下層呈紅色，便于吸取上層水相。
適用范圍
TriiZol適用于動植物細胞或組織及細菌的總RNA抽提。它能夠有效抑制RNA的降解，確保提取的RNA無DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值為1.8-2.0。
提取效果
產(chǎn)量：每百萬細胞用TriiZol抽提可得5-15μg RNA；每毫克組織用TriiZol抽提可得1-10μg RNA。產(chǎn)量因細胞和組織不同而異。
質(zhì)量：提取的RNA可直接用于Northern、點雜交、純化mRNA、體外翻譯、RNase protection assay、cDNA克隆、RT-PCR等實驗，也可用于基因表達芯片分析、高通量測序等對RNA質(zhì)量要求較高的情況。
使用方法
細胞裂解
組織樣本：
每50-100 mg組織加1 ml TriiZol，樣品體積不應(yīng)超過TriiZol體積的10%。
將動物或植物組織切成小塊，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理。
將研磨好的組織粉末快速轉(zhuǎn)入裝有1 ml TriiZol的2 ml離心管中，在渦旋振蕩器上迅速振蕩混勻，置于冰上。
對于富含蛋白、脂肪或多糖物質(zhì)的組織樣品，可于4℃ 12,000 x g離心10 min，然后吸取上清至新的離心管中。
細胞樣本：
貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液，每10 cm²培養(yǎng)面積（6孔板單孔或35 mm平皿）加入1 ml TriiZol，用加樣器吹打數(shù)次，確保細胞完全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。
懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，每5-10×10⁶動植物或酵母細胞，或每1×10⁷細菌細胞加入1 ml TriiZol，用加樣器吹打，使其完全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。
液相分離
裂解產(chǎn)物于室溫放置5 min，使核酸-蛋白復合物完全分離。
每1 ml TriiZol加入0.2 ml氯仿，蓋緊管蓋，劇烈振蕩15 s，室溫放置2-3 min。
4℃ 12,000 x g離心15 min，樣品會分成三層：桔黃色的下層有機相，中間層和無色的上層水相。
吸取含總RNA的上層水相至新的離心管中，吸取水相的體積為所用TriiZol試劑的60%。
RNA回收
按照每1 ml TriiZol的最初使用量加入0.5 ml異丙醇，顛倒數(shù)次混勻，室溫放置10 min。
4℃ 12,000 x g離心10 min，棄除上清，可見膠狀的RNA沉淀。
按照每1 ml TriiZol的最初使用量加入1 ml 75%乙醇，顛倒數(shù)次混勻，洗滌沉淀。
4℃ 12,000 x g離心5 min，棄除上清。
室溫倒置5-10 min晾干或真空抽干。
加入適量（如25 μl）DEPC-ddH₂O或TE緩沖液，用加樣器吹打數(shù)次溶解RNA。
通過RNA電泳以及紫外分光光度計檢測，確定RNA的濃度、純度和完整性。
所得的RNA應(yīng)立即使用或適量分裝后-80℃保存，避免反復凍融。
儲存/保存方法
溫度：4℃避光密閉保存，保質(zhì)期12個月。
Q1：TriiZol提取的RNA質(zhì)量如何？
A：TriiZol提取的RNA無DNA和蛋白污染，A260/280值一般為1.8-2.0，RNA完整性好，適用于多種下游應(yīng)用，包括Northern、點雜交、純化mRNA、體外翻譯、RNase protection assay、cDNA克隆、RT-PCR、基因表達芯片分析和高通量測序等。
Q2：TriiZol的保存條件是什么？
A：4℃避光密閉保存，保質(zhì)期12個月。
Q3：使用TriiZol時需要注意什么？
A：RNA酶污染：所有離心管、槍頭及相關(guān)溶液都必須無RNA酶污染。耐高溫器物可180℃烘烤4小時以去除RNA酶，其他器物可用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后滅菌、烘干。溶液需用DEPC水配制。
凍存樣品：使用凍存的細胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細胞或組織差。如果不能及時抽RNA，建議先加入適量TriiZol，并裂解樣品后凍存。
操作防護：必須戴一次性手套操作，且盡量不要對著RNA樣品呼氣或說話，以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作。
安全防護：TriiZol含有有毒物質(zhì)苯酚，避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛，請戴防護眼鏡或使用透明保護屏。如皮膚接觸TriiZol，請立即用大量去垢劑和水沖洗，如仍有不適，請聽取醫(yī)生意見。
Q4：如何測量RNA的A260/A280比值？
A：建議使用RNA定量緩沖液對樣品稀釋后，進行測量。
Q5：TriiZol提取的RNA產(chǎn)量如何？
A：每百萬細胞用TriiZol抽提可得5-15μg RNA；每毫克組織用TriiZol抽提可得1-10μg RNA。產(chǎn)量因細胞和組織不同而異。
Q6：TriiZol提取的RNA可以用于哪些下游應(yīng)用？
A：提取的RNA可直接用于Northern、點雜交、純化mRNA、體外翻譯、RNase protection assay、cDNA克隆、RT-PCR等實驗，也可用于基因表達芯片分析、高通量測序等對RNA質(zhì)量要求較高的情況。
總結(jié)
愛必信的TriiZol試劑以其高效、可靠和操作簡便的特點，成為了實驗室中提取高質(zhì)量RNA的理想選擇。它能夠有效抑制RNA的降解，確保提取的RNA無DNA和蛋白污染，適用于多種下游應(yīng)用。
產(chǎn)品簡介
TriiZol是一種用于細胞或組織總RNA抽提的試劑。它采用與Invitrogen公司的TRIzol完全相似的原理和方法，抽提的方法和步驟完全相同。TriiZol的顏色和TRIzol相同，加入氯仿后上層呈無色，下層呈紅色，便于吸取上層水相。
適用范圍
TriiZol適用于動植物細胞或組織及細菌的總RNA抽提。它能夠有效抑制RNA的降解，確保提取的RNA無DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值為1.8-2.0。
提取效果
產(chǎn)量：每百萬細胞用TriiZol抽提可得5-15μg RNA；每毫克組織用TriiZol抽提可得1-10μg RNA。產(chǎn)量因細胞和組織不同而異。
質(zhì)量：提取的RNA可直接用于Northern、點雜交、純化mRNA、體外翻譯、RNase protection assay、cDNA克隆、RT-PCR等實驗，也可用于基因表達芯片分析、高通量測序等對RNA質(zhì)量要求較高的情況。
使用方法
細胞裂解
組織樣本：
每50-100 mg組織加1 ml TriiZol，樣品體積不應(yīng)超過TriiZol體積的10%。
將動物或植物組織切成小塊，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理。
將研磨好的組織粉末快速轉(zhuǎn)入裝有1 ml TriiZol的2 ml離心管中，在渦旋振蕩器上迅速振蕩混勻，置于冰上。
對于富含蛋白、脂肪或多糖物質(zhì)的組織樣品，可于4℃ 12,000 x g離心10 min，然后吸取上清至新的離心管中。
細胞樣本：
貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液，每10 cm²培養(yǎng)面積（6孔板單孔或35 mm平皿）加入1 ml TriiZol，用加樣器吹打數(shù)次，確保細胞完全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。
懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，每5-10×10⁶動植物或酵母細胞，或每1×10⁷細菌細胞加入1 ml TriiZol，用加樣器吹打，使其完全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。
液相分離
裂解產(chǎn)物于室溫放置5 min，使核酸-蛋白復合物完全分離。
每1 ml TriiZol加入0.2 ml氯仿，蓋緊管蓋，劇烈振蕩15 s，室溫放置2-3 min。
4℃ 12,000 x g離心15 min，樣品會分成三層：桔黃色的下層有機相，中間層和無色的上層水相。
吸取含總RNA的上層水相至新的離心管中，吸取水相的體積為所用TriiZol試劑的60%。
RNA回收
按照每1 ml TriiZol的最初使用量加入0.5 ml異丙醇，顛倒數(shù)次混勻，室溫放置10 min。
4℃ 12,000 x g離心10 min，棄除上清，可見膠狀的RNA沉淀。
按照每1 ml TriiZol的最初使用量加入1 ml 75%乙醇，顛倒數(shù)次混勻，洗滌沉淀。
4℃ 12,000 x g離心5 min，棄除上清。
室溫倒置5-10 min晾干或真空抽干。
加入適量（如25 μl）DEPC-ddH₂O或TE緩沖液，用加樣器吹打數(shù)次溶解RNA。
通過RNA電泳以及紫外分光光度計檢測，確定RNA的濃度、純度和完整性。
所得的RNA應(yīng)立即使用或適量分裝后-80℃保存，避免反復凍融。
儲存/保存方法
溫度：4℃避光密閉保存，保質(zhì)期12個月。
Q1：TriiZol提取的RNA質(zhì)量如何？
A：TriiZol提取的RNA無DNA和蛋白污染，A260/280值一般為1.8-2.0，RNA完整性好，適用于多種下游應(yīng)用，包括Northern、點雜交、純化mRNA、體外翻譯、RNase protection assay、cDNA克隆、RT-PCR、基因表達芯片分析和高通量測序等。
Q2：TriiZol的保存條件是什么？
A：4℃避光密閉保存，保質(zhì)期12個月。
Q3：使用TriiZol時需要注意什么？
A：RNA酶污染：所有離心管、槍頭及相關(guān)溶液都必須無RNA酶污染。耐高溫器物可180℃烘烤4小時以去除RNA酶，其他器物可用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后滅菌、烘干。溶液需用DEPC水配制。
凍存樣品：使用凍存的細胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細胞或組織差。如果不能及時抽RNA，建議先加入適量TriiZol，并裂解樣品后凍存。
操作防護：必須戴一次性手套操作，且盡量不要對著RNA樣品呼氣或說話，以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作。
安全防護：TriiZol含有有毒物質(zhì)苯酚，避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛，請戴防護眼鏡或使用透明保護屏。如皮膚接觸TriiZol，請立即用大量去垢劑和水沖洗，如仍有不適，請聽取醫(yī)生意見。
Q4：如何測量RNA的A260/A280比值？
A：建議使用RNA定量緩沖液對樣品稀釋后，進行測量。
Q5：TriiZol提取的RNA產(chǎn)量如何？
A：每百萬細胞用TriiZol抽提可得5-15μg RNA；每毫克組織用TriiZol抽提可得1-10μg RNA。產(chǎn)量因細胞和組織不同而異。
Q6：TriiZol提取的RNA可以用于哪些下游應(yīng)用？
A：提取的RNA可直接用于Northern、點雜交、純化mRNA、體外翻譯、RNase protection assay、cDNA克隆、RT-PCR等實驗，也可用于基因表達芯片分析、高通量測序等對RNA質(zhì)量要求較高的情況。
總結(jié)
愛必信的TriiZol試劑以其高效、可靠和操作簡便的特點，成為了實驗室中提取高質(zhì)量RNA的理想選擇。它能夠有效抑制RNA的降解，確保提取的RNA無DNA和蛋白污染，適用于多種下游應(yīng)用。
| 名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| TriiZol | abs60154-100ml | 100ml |
| MACS Tissue Storage Solution, 100mL | 130-100-008 | 100ml |
| Amine Coupling Kit | BR100050 | 1套 |
標簽：
RNA抽提
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