牛源病原體的多重熒光定量PCR檢測方法

牛血清中富含血漿蛋白、多肽、生長因子、激素及無機物等，被廣泛應用于疫苗生產、細胞培養和生物醫藥等領域，可應用于醫學診斷中檢測病原體的抗體水平，也可作為組織培養、細胞培養和診斷試劑等重要的原輔材料。新生牛血清是從新生14小時內的小牛血液中提取的血清，經過無菌采集、分離和過濾等工藝制成，常用于疫苗以及單克隆抗體的制備，但是這種生物來源的制品，容易含有生物本體來源的病毒，特別是一些病毒類生物活性物質污染會嚴重影響制品的質量和安全。
 
由于新生牛血清中病毒來源廣、種類多，因此針對新生牛血清的病毒檢測是非常必要的，病毒檢測的目的是力求從源頭上控制牛血清中的病毒，保證新生牛血清原材料質量，保證實驗和生產的順利進行。
 
有報道指出,由于使用了污染牛腹瀉病毒（BVDV）的胎牛血清,可導致胎牛腎細胞、牛腎細胞等多種細胞系的污染。牛腹瀉病毒是疫苗生產中常見的污染物及嚴重的外源性致病原之一,因此實際生產過程中牛血清中BVDV的檢測尤為重要。牛血清檢測牛細小病毒（BPV）、 狂犬病病毒（RV）、Ⅲ型呼腸孤病毒（Reo-3）、生牛血清檢測Ⅲ型牛副流感病毒 （PI3）、牛腹瀉病毒（BVDV）、Ⅲ型牛腺病毒（BAV-3）等都是牛血清中重要的病原外源因子。
 
根據《中國藥典三部》(2010版)要求:新生牛血清在生產使用前需嚴格檢測至少6種牛源性病毒，包括牛細小病毒(BPV)、狂犬病病毒(RV)、Ⅲ型呼腸孤病毒(Reo-3)、Ⅲ型牛副流感病毒(PI3)、牛腹瀉病毒(BVDV)和Ⅲ型牛腺病毒(BAV-3)。檢測方法包括細胞培養法、免疫熒光抗體檢查法，以及針對無法用感染試驗檢測的病毒采用的核酸檢測法。未經病毒滅活處理的牛血清若有任何一項檢測呈陽性，則不得用于生產。翼和生物建立外源性病毒的快速檢測方法，通過熒光定量的方式檢測牛源性病毒，將有助于把控牛血清質量,防止外源性病毒的污染。翼和生物推出的牛源病原體多重熒光PCR檢測試劑盒，具有精準、靈敏、穩定、高效等特點，能夠同時檢測多種病原體，廣泛應用于牛血清進口檢測、生物制藥生產以及細胞培養研究等領域,檢測靈敏度可達10 copies/μL。