scFv修飾的病毒樣顆粒遞送RNP實現(xiàn)體內(nèi)編輯T細胞

文章來源公眾號：Bloki           作者：Bloki

對LNP、病毒的靶向修飾是當下熱點，24年，諾獎得主Jennifer A. Doudna發(fā)過一篇Nature Biotechnology，用scFv修飾的病毒樣顆粒遞送RNP實現(xiàn)體內(nèi)基因編輯，具體內(nèi)容如下：

22年，一篇Cell用scFv+突變VSVG的病毒實現(xiàn)了細胞靶向遞送GFP

作者計劃用scFv（藍色）+突變VSVG（黃色）的病毒樣顆粒遞送RNP（Cas-gRNA復(fù)合物）

294T細胞同時表達EGFP和抗原，制備出工具靶細胞，和陰性細胞混合

CD19 scFv修飾的病毒樣顆粒遞送敲B2M的RNP，特異性的敲CD19+細胞的B2M優(yōu)化，引入核轉(zhuǎn)運相關(guān)NES和NLS肽，提高編輯效率

優(yōu)化后，不同細胞上均可高效實現(xiàn)基因編輯

GS-CA1抑制病毒入核會影響慢病毒介導(dǎo)熒光蛋白表達，但不影響遞送RNP的病毒樣顆粒實現(xiàn)基因編輯（敲B2M）  

表征scFv修飾的病毒樣顆粒 

CD3、CD28 scFv修飾的病毒樣顆粒實現(xiàn)基因編輯的同時還可以促進T細胞激活、增殖

CD3 scFv修飾的病毒樣顆粒敲B2M

CD3、CD4雙scFv修飾的病毒樣顆粒高效、特異性敲CD4 T細胞的B2M – 雙靶向scFv修飾比較新穎，之前分享的一篇文章也用過類似策略可以體內(nèi)制備CAR-T的慢病毒 

體內(nèi)介導(dǎo)CD19 CAR表達，實現(xiàn)基因編輯 

用小鼠體重初步說明安全性 

體內(nèi)搞掉部分B細胞 

體內(nèi)制備CAR-T、體內(nèi)基因編輯都是熱點，雙scFv修飾的玩法值得關(guān)注，筆者還沒見到LNP上玩雙靶向。