上期我們分享了“空間組學樣本制備指南 | 打造完美切片:DSP技術(shù)樣本處理全攻略”
本期我們將大家常見的問題以及項目經(jīng)驗為大家整理成了FAQ,趁熱打鐵與您分享!
1、DSP(Digital Spatial Profiling)是一個空間多組學技術(shù),這些組學可以同時檢測嗎?具體包含哪些組學呢?
答:可以在一張切片同時檢測轉(zhuǎn)錄組和蛋白組。包含哪些具體組學產(chǎn)品見下圖1。
2、ROI和AOI有什么區(qū)別呢?
答:在 Digital Spatial Profiling (DSP) 技術(shù)中,ROI(Region of Interest)是指在組織切片上由研究者根據(jù)形態(tài)學特征或標記物選擇的感興趣區(qū)域,是進行空間分子分析的總體框架。
AOI(Area of Illumination/Analysis)則是 ROI 內(nèi)部進一步定義的分析單元,代表實際進行熒光照射、寡核苷酸釋放及分子信息采集的空間范圍。
換言之,ROI 是“宏觀選區(qū)”,決定研究的整體區(qū)域;AOI 是“微觀劃分”,決定數(shù)據(jù)獲取的精細尺度。二者的合理結(jié)合可實現(xiàn)從組織結(jié)構(gòu)層面到分子分辨層面的空間多組學解析。(具體可全選圈選模式見下圖2)

3、DSP成像marker可以自由選擇嗎?
答:不完全自由,主要受熒光通道的限制。DSP主要包含以下四種熒光通道:
|
通道名稱 |
典型代表熒光染料或用途 |
激發(fā)波長(峰值 ± 帶寬) |
發(fā)射波長(峰值 ± 帶寬) |
說明 |
|
FITC / 525 nm |
Alexa Fluor 488, SYTO 13(DNA 染色) |
480 ± 28 nm |
516 ± 23 nm |
常用于 DNA 染色(如 SYTO 13),無需用 DAPI,否則會損壞條碼 |
|
Cy3 / 568 nm |
AF532, Cy3, PE, TRITC |
538 ± 19 nm |
564 ± 15 nm |
可用于細胞標記與結(jié)構(gòu)識別 |
|
Texas Red / 615 nm |
AF594, Texas Red, DyLight594 |
588 ± 19 nm |
623 ± 30 nm |
用于中紅光區(qū)染色標記 |
|
Cy5 / 666 nm |
AF647, Cy5, DyLight650 |
645 ± 19 nm |
683 ± 30 nm |
信噪比高,適合低豐度靶點檢測 |
4、DSP實際圈選的界面怎么操作?
答:(1)ROI/AOI圈選主界面。

(2)ROI圈選模式-多種可選
(3)ROI菜單(根據(jù)形狀)
ROI菜單內(nèi)容:①ROI名稱、坐標及尺寸;②圈選面積&包含核數(shù);③備注等其他信息(可選);④AOI信息(可選);⑤不超過660×770μm
(4)AOI菜單(根據(jù)顏色)
AOI定義:通道之間的邏輯運算;
通道閾值是所有ROI通用
(5)渲染設(shè)置內(nèi)容:
①Min&Max:明暗度和對比度;
②不同樣本或ROI可靈活調(diào)整
“空間維度+多組學”-高分中標公式!

本期分享挑選了top問題進行解答,若您對DSP有其他疑問,請隨時聯(lián)系小備~
注:本文所用圖片均來源于樂備實,版權(quán)歸其所有,請勿擅自挪用。
樂備實是國內(nèi)專注于提供高質(zhì)量蛋白檢測以及組學分析服務(wù)的實驗服務(wù)專家,自2018年成立以來,樂備實不斷尋求突破,公司的服務(wù)技術(shù)平臺已擴展到單細胞測序、空間多組學、流式檢測、超敏電化學發(fā)光、Luminex多因子檢測、抗體芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫組化、DSP空間多組學等30多個,建立起了一套涵蓋基因、蛋白、細胞以及組織水平實驗的完整檢測體系。
我們可提供從樣本運輸、儲存管理、樣本制備、樣本檢測到檢測數(shù)據(jù)分析的全流程服務(wù)。憑借嚴格的實驗室管理流程、標準化實驗室操作、原始數(shù)據(jù)儲存體系以及實驗項目管理系統(tǒng),已經(jīng)為超過3000家客戶單位提供服務(wù),年檢測樣本超過100萬,受到了廣大客戶的信任與支持。