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          基于新型納米纖維的LentiHERO在LVV和HSV純化工藝中的應用

          瀏覽次數:455 發布日期:2025-8-29  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
          溶瘤病毒如單純皰疹病毒(HSV)和痘苗病毒因能在腫瘤細胞中選擇性復制,誘導腫瘤細胞溶解和觸發免疫應答的能力,而在癌癥治療領域中逐漸受到重視。同樣,慢病毒載體(LVV),如伽利略病毒(GalV)和VSV-G能夠通過實現細胞類型特異性轉導來增強基因治療效果。這些病毒對下游的純化策略產生了顛覆性影響。
           
          常用于基因治療的病毒載體尺寸示意圖:腺相關病毒AAV、慢病毒LVV、單純皰疹病毒HSV和痘苗病毒VACV
           
          對于這些尺寸較大的病毒載體,傳統的基于瓊脂糖的層析方法在工藝放大、產量提升以及雜質(如HCP等)去除等方面存在局限性。為了解決這些瓶頸問題,Astrea Bioseparations研發推出的新一代基于納米纖維的層析介質LentiHERO為病毒純化提供了新的思路。相比于傳統的瓊脂糖基質,LentiHERO不論從結合載量、雜質去除還是工藝放大等方面都具有顯著優勢。以下研究將從病毒的結合能力、回收率、HCP和dsDNA的去除能力、工藝放大等方面充分評估LentiHERO對不同包膜(VSV-G、4070A、GalV)的LVV假病毒和溶瘤病毒HSV的純化性能。
           
          1. LVV生產和純化工藝流程

           
          • LentiHEROVSV-G LVV有更高的結合力與動態結合載量
          下圖是VSV-G LVV樣品在不同流速下通過LentiHERO(LH)與Q膜流穿液的TU和p24檢測結果,LentiHERO對LVV的結合能力顯著高于Q膜。由此表明,LeniHERO在LVV流穿之前能夠處理更大體積的料液。

           
          • LentiHERO有更高的動態結合載量

           
          • 提升LVV回收率與純度的優化方案
          如下圖所示,條件優化后LVV回收率提升至82%,收獲的病毒滴度>2E+9 TU/mL,且HCD/HCP去除率>90%。
           
          • LentiHERO®可大幅減少純化的緩沖液體積
          生產規模所需的緩沖液體積預估
           
          • 精氨酸洗脫可以省去洗脫后的稀釋步驟,簡化工藝流程;
          • 低鹽或精氨酸洗脫可顯著減少緩沖液用量并降低處理體積。
           
          • 使用LentiHERO® 1純化非VSV-G包膜的LVV假病毒
          重組慢病毒可以通過不同的包膜蛋白來提高轉導效率和改變特異性,從而直接影響下游純化策略。
          1. 不同類型慢病毒在細胞和基因治療中的應用
           
          1. LentiHERO® 1對LVV的回收率(TU)

          • LentiHERO®成功實現了非VSV-G慢病毒(4047A:100%,GalV:36%)的高效純化。
          • LentiHERO®具備強大的雜質去除能力,在不影響載體功能的情況下可去除>98%的HCP及>87%的dsDNA殘留
           
          1. HSV-1溶瘤病毒生產和純化工藝流程

           
          • LentiHERO®純化野生型HSV-1(KOS)的結果
          篩選裝置上樣量15ml,測得填料載量為1.5E+10 IU/ml。

          感染性HSV回收率為56%,LentiHERO®載量可達9.2E+9 IU/ml,大部分感染性HSV在0.6M NaCl條件下被洗脫。
           
          • LentiHERO®純化pBACYAC-HSV-1(KOS)的結果
          篩選裝置上樣量20ml,測得填料載量為3E+8 IU/ml。
          用0.8M精氨酸洗脫,HSV回收率可達到69%,LentiHERO®載量可達1.4E+8 IU/ml,同時實現高效的雜質去除。
           
          結論
          • LentiHERO®弱陰離子納米纖維層析技術可廣泛應用于多種病毒載體的純化,包括不同包膜的慢病毒(4070A,VSV-G,GalV),溶瘤病毒HSV-1;
          • LentiHERO®純化病毒具有高回收率:4070A: 100%,VSV-G: 82%,GalV: 36%,HSV-1: 69%
          • LentiHERO®具有高效的宿主蛋白去除效率:HCP去除率>97%
          • LentiHERO®可放大形成平臺工藝,適用于工業化生產
          • LentiHERO®具備拓展應用于其他病毒載體的潛力,如腺病毒,痘苗病毒及病毒樣顆粒(VLPs)等
          • LentiHERO®支持基因治療及溶瘤病毒生產工藝的優化

          產品信息
          貨號 品名 規格
          NL100100 Nereus LentiHERO 2 unit pack(離心管形式)
          LH0001001A LentiHERO® 1 1 mL(層析柱形式)
          LH0010001B LentiHERO® 10 10 mL(層析柱形式)
          LH0010001C LentiHERO® 100 100 mL(層析柱形式)
           
           
          如您對上述產品感興趣,歡迎點擊這里填寫信息,Astrea Bioseparations技術專家將為您提供個性化優化方案,切實幫您解決純化工藝中的疑難問題。
           

          Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學,擁有超過30年層析介質研發和生產經驗,是世界級層析介質產品與服務供應商。目前使用Astrea的產品已有超過21個生產工藝通過了FDA和EMA的批準。Astrea Bioseparations在全球擁有3個研發和生產基地,專注為生物大分子和CGT領域提供行業領先的層析介質和技術服務。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術,解決了傳統生物分離工具載量低和工藝耗時問題,實現更快、更環保、更具成本效益的純化過程,完全符合當今生物治療創新的需求。
           
          西美杰是Astrea Bioseparations中國區代理,為用戶提供完善的技術支持與售后服務。歡迎隨時撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網站www.xmjsci.com了解更多信息。

           
          發布者:北京西美杰科技有限公司
          聯系電話:4000-50-4006,010-88597838,021-63599871/72(上海分公司)
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