增強型RIPA裂解液使用說明書

對于細胞：

注意：取適當量的裂解液，放與4℃預冷，使用前數分鐘內需加入酶抑制劑。

1.  貼壁細胞，細胞刮刮下細胞，計數，并收集5×106 個細胞，600g 離心5分鐘，盡量吸盡上清，用預冷的PBS重懸細胞，600g 離心5分鐘收集細胞，盡量吸盡上清，加入0.5ml的預冷的裂解液，用移液器吹打數下，冰上孵育30分鐘, 10000g離心10分鐘，取上清，即為蛋白提取物。

注意：可以直接將裂解液加入培養細胞的器皿中裂解細胞，具體操作如下，

A.用移液槍小心吸去培養液，

B.加入適量的預冷的PBS,

C.用移液槍小心吸去PBS,

D.按照下表加入裂解液，冰上孵育30分鐘。

E.將裂解液轉入離心管中， 10000g離心10分鐘，取上清，即為蛋白提取物。

2.懸浮細胞，計數，并收集5×106 個細胞，600g 離心5分鐘，盡量吸盡上清，用預冷的PBS重懸細胞，600g 離心5分鐘收集細胞，盡量吸盡上清，加入0.5ml的預冷的裂解液，用移液器吹打數下，冰上孵育30分鐘, 10000g離心10分鐘，取上清，即為蛋白提取物。

對于組織：

注意：取適當量的裂解液，放與4℃預冷，使用前數分鐘內需加入酶抑制劑。

1. 手術切除的組織塊迅速置于預冷的生理鹽水中，漂洗數次，洗凈組織血跡，用濾紙吸干組織表面液體，將組織切成幾個較小的組織塊。

2. 稱量組織，按組織凈重(g)：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相應體積的裂解液進行勻漿 ，(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。

3. 勻漿器勻漿,肉眼觀察無明顯組織塊，冰上孵育30分鐘。

4. 10000g離心10分鐘,取上清，即為蛋白提取物。

結果實例：    

   M        N                M         N                 M         N     

          DSG3                     HSP90                      PCNA

M:Hela Cells  N：A549 Cells

如圖：增強型RIPA裂解液提取細胞蛋白，BCA測定蛋白濃度，上樣20ug，電泳，轉膜，孵育博士德一抗，應用博士德ECL發光液顯色。

故障排除: