細胞支原體高靈敏檢測方法

細胞支原體污染
支原體無細胞壁，大小僅 0.1 - 0.3 μm，可穿透常規的 0.22μm 濾膜，常規過濾除菌的手段對支原體無效，難以阻擋。

細胞支原體污染是細胞培養領域普遍且比較棘手的問題，科研實驗室和生物制藥行業均存在較高污染比例。對細胞而言，支原體會掠奪培養基中的營養物質，導致細胞生長緩慢甚至停止，還會破壞細胞膜完整性，影響細胞的正常代謝與功能。

支原體污染隱蔽性強、危害大、防控難度高，讓很多研究者頭痛不已。細胞支原體污染比例居高不，有些實驗室支原體污染的平均比例可達 30%-60%。且傳代次數越多的細胞，污染概率越高。新引進的細胞系若未經過嚴格篩查，很容易成為支原體的污染源；生物制藥領域里一些動物源性原材料常攜帶支原體，使得生產環節中的細胞體系也面臨很高的支原體的污染風險。

支原體污染初期不會引起培養基渾濁、變色等明顯異常，外觀上也無明顯變化，很容易被忽視。污染細胞在市場流通，同時培養基、血清、移液槍頭等試劑耗材滅菌不嚴格，以及實驗人員操作不規范等，都為支原體污染提供了可乘之機。支原體可通過空氣、氣溶膠、接觸等多種方式傳播，一些生物實驗用儀器，如超凈工作臺、離心機、培養箱、實驗槍頭和試管架等都可能成為傳播媒介。一旦出現污染，若未及時發現和處理，極易擴散至整個實驗室的細胞培養體系，而且很長時間內無法清除，浪費了時間和人力、物力，帶來巨大經濟損失。

細胞支原體高靈敏檢測
支原體污染會改變宿主細胞的結構與功能，致實驗結果不穩定，須對培養細胞定期進行支原體檢測。當前的支原體檢測方法，存在檢測滯后性。傳統檢測方法如分離培養法耗時長達數周，難以快速排查污染。由于污染初期無明顯特征，往往等到細胞出現異常時，污染已擴散，清除難度大。

翼和生物高靈敏支原體檢測試劑盒采用多套引物探針在FAM通道檢測支原體DNA，采用一套引物探針在VIC通道（有些儀器是HEX通道）檢測內參DNA，參照 EP 2.6.7 和 JP XVII 支原體檢測相關要求進行驗證；檢測對象為細胞培養的上清液，細胞沉淀或其他生物制品。

該試劑盒需要配合推薦使用的核酸抽提方案，檢測靈敏度達到10 CFU/mL。檢測結果可靠：抽提加入內標核酸，全過程質量控制。實驗穩定：全程閉管操作，無交叉污染。操作方便：操作簡單，無需電泳步驟。