大小鼠中Sa,Kp,Pp 3種常見病原菌的檢測

三種常見病原菌
肺炎克雷伯菌是革蘭氏陰性桿菌，常成對或短鏈狀排列，具有肥厚莢膜，通常無鞭毛，無動力，但有菌毛，目前已發現超過80種不同的K抗原血清型和O抗原血清型。肺炎克雷伯菌可通過腹腔、呼吸道等途徑感染小鼠，導致敗血癥和多器官衰竭。毒力因子包括：莢膜多糖、脂多糖、菌毛、外膜蛋白、毒素（部分高毒力株可能產生如腸毒素、細胞毒素）。

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），分布于自然界（土壤、空氣、水）以及人類和動物皮膚、鼻腔、黏膜上，是革蘭氏陽性球菌。顯微鏡下常呈現葡萄串狀排列，在培養基上可形成金黃色菌落。

嗜肺巴氏桿菌菌體多呈球狀或短棒狀單體排列，美蘭染色可見典型兩極著色現象。細胞壁結構經革蘭氏染色驗證為陰性，掃描電鏡觀察顯示其表面具有莢膜結構。嗜肺巴氏桿菌是布魯桿菌科巴斯德氏菌屬微生物，廣泛存在于嚙齒類動物及實驗動物體內，該菌種具有條件致病性，可引發免疫缺陷動物模型感染并造成嚴重后果。

新修訂的國家標準《實驗動物微生物、寄生蟲學等級及監測》（GB 14922—2022）中，把無特定病原體（specific pathogen-free，SPF）級小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠、兔的金黃色葡萄球菌列為必要時檢測項。在此前的國標中，金黃色葡萄球菌更是被列為必須檢測項目。而肺炎克雷伯菌、嗜肺巴氏桿菌是SPF級大小鼠必須排除的病原體。

常見病原菌的檢測
這三種菌在清潔級實驗動物中檢出率較高。需要一種快捷的檢測方案實現三種菌的檢測，并且檢測準確度高，靈敏度高。

病原菌的檢測通常依賴培養法的檢測，通過幾天的培養后觀察病原菌的形態、染色等生化反應，判斷菌的種類，這種檢測方法對實驗人員的經驗要求比較高，培養時間比較長，遇到大量的檢測任務時比較耗費時間和人力成本。

當前檢測病原菌的一種有效的手段是qPCR的檢測方案。qPCR是對病原體核酸的指數級別的擴增，可放大檢測信號，同時通過設計特異性的針對病原菌的引物來提升檢測的準確性。

翼和生物Biowing®SPF級大小鼠常見病原菌qPCR檢測試劑盒，采用高靈敏度和特異性的探針法qPCR技術，專為在多種樣本類型中快速、高靈敏地篩查SPF級實驗室大小鼠常見的6種病原菌而設計。

本試劑盒采用Taqman熒光定量PCR技術，設計了3套引物探針，設置兩管qPCR體系，分別在FAM（金黃色葡萄球菌Sa），HEX（嗜肺巴斯德桿菌Pp），ROX（肺炎克雷伯菌Kp）三個通道檢測3種病原菌。該試劑盒具有以下特點：靈敏：檢測靈敏度較高，10 CFU可被有效檢出。穩定：全程閉管操作，無交叉污染。可靠：含內參對照，避免假陰性。方便：操作簡單，一步法檢測。

由于PCR反應非常靈敏，實驗操作中應注意，以免發生核酸污染。