無血清細胞凍存液凍存復蘇操作步驟

細胞凍存是細胞培養技術中細胞進行保種并長期保存的常用方法，其中細胞凍存液，作為細胞凍存時必須使用的一種溶液，不僅僅是說只是用來進行細胞的保存，在細胞的購買、寄贈、交換和運送過程中也起著關鍵作用，因此選擇一款好的細胞凍存液就尤為重要。

無血清細胞凍存液是指不含血清和動物源成分的細胞凍存液，對比傳統細胞凍存液存在的優勢：

1.是一種通用型的細胞凍存液，可用于凍存人和各種動物細胞株；

2.完全凍存液配方，即開即用，方便快捷；

3.非程序降溫，-80℃低溫冰箱長期凍存，也可液氮凍存；

4.特別配方（主要成分為DMSO和氨基酸）具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力；

5.不含動物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細胞安全；

6.可孔板（細胞培養板）凍存，可用于雜交瘤細胞的凍存液.

無血清細胞凍存液操作步驟，簡單、方便：

一、細胞冷凍保存方法：

選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。

凍存管凍存方式：

1、按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。

2、按照培養細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數。（參考：5×105至5×106cells/ml）。

3、取相當于所需細胞數的細胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。

4、加入適量無血清細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢混合均勻，制成細胞混合液。

5、將離心管中的細胞混合液分裝于已標示的冷凍保存管中。

6、直接將含細胞懸液的凍存管放入-80℃冰箱，冷凍保存。

7、若研究者需要液氮保存時，可先放入-80℃冰箱過夜后，再移至-196℃液氮罐。

原位凍存方式：

1、從培養狀態良好的細胞培養板中將培養基上清吸取干凈。

2、加入適量無血清細胞凍存液于培養孔板中，充分浸潤細胞。

3、蓋上蓋板，做好密封措施，防止染菌。

4、直接將含凍存液的細胞培養板放入-80℃冰箱，冷凍保存。

二、凍存細胞復蘇方法

凍存管復蘇方式：

1、從冰箱取出凍存細胞管，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。

2、待凍存的細胞懸液完全融化后，立即加入1ml細胞培養基于該冷凍管中與細胞混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養基的試管中，混合均勻。

3、離心收集培養細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。

4、清洗細胞，充分洗凈殘留凍存液。

5、加入適量新鮮培養基，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養瓶中。

6、鏡檢后，研究者可根據各自方法和需要來進行細胞培養。

原位復蘇方式：

1、從冰箱取出凍存培養板，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。

2、待凍存的細胞懸液完全融化后，輕輕吸去細胞凍存液，按照常規換液操作加入新鮮培養基繼續進行培養。