常用的免疫組織化學染色方法（下）

常用的免疫組化染色方法很多，有直接法和間接法。直接法是將酶或熒光素等標記在第一抗體上，然后用該被標記的第一抗體與組織細胞中的抗原結合，即可以顯色或在熒光顯微鏡下觀察結果；

間接法是將標記物標記在第二抗體或第三抗體（復合物）上，其方法是先將特異性的第一抗體與組織細胞中相應的抗原結合，再將被標記上標記物的第二抗體與第一抗體結合，最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結果。如果標記物是標記在第三抗體（復合物）上，則第二抗體與第一抗體結合后，再用被標記上標記物的第三抗體（復合物）與第二抗體結合，最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結果。

常用的EPOS一步法屬于直接法，EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB（S-P）法、SABC法、和CSA法等屬于間接法。相對來說直接法特異性高，敏感性低，而間接法則敏感性高，特異性低。

抗生物素蛋白鏈菌素-生物素復合物（streptavidin biotincomplex，SABC）法方法和ABC法相類似，不同之處是SABC法用抗生物素蛋白鏈菌素代替了ABC法ABC復合物中的卵白素獲得SABC復合物。由于抗生物素蛋白鏈菌素與生物素的親和力更高，而且SABC復合物不需在使用前配制，所以SABC法比ABC法更加敏感和簡單。

酶標聚合物法（labelled dextran polymer，LDP）法應用了酶標聚合物技術，如EnVision檢測系統，首先將辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記在葡聚糖聚合物上，然后再與第二抗體連接而形成EnVision二抗。

LDP法屬于二步法，特異性一抗和組織細胞抗原結合后，再用EnVision二抗與抗原抗體復合物中的一抗結合，最后通過EnVision二抗上的酶參與顯色反應。

由于EnVision二抗中的聚合物結構的獨特，可以連接更多的二抗，使每個多聚物有超過20個位點與第一抗體結合，聚合物上能標記上的酶數量較多。因此在顯色時有充足的酶與顯色劑起反應。

因此LDP法的敏感性高于ABC、LSAB等方法。此外，LDP法中的第二抗體沒有生物素的存在，不會出現ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內源性生物素起交叉反應的現象，因此LDP法的非特異性背景染色極低。

增強聚合物一步法（enhanced polymer one setp，EPOS）法也屬于酶標聚合物法，和LDP法一樣，是利用酶標聚合物技術，將辣根過氧化物酶標記在葡聚糖聚合物上，然后再與第一抗體連接而形成EPOS一抗。

EPOS法屬于直接法，直接用EPOS一抗特異性和組織細胞抗原結合后，一抗上的酶參與顯色反應。由于EPOS一抗中的聚合物上能標記上的酶數量較多，在顯色時有充足的酶與顯色劑起反應。因此EPOS法雖然是直接法，但具有高敏感性。

此外，EPOS一抗沒有生物素的存在，不會出現ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內源性生物素起交叉反應的現象，背景清晰。但EPOS一抗種類較少，難以普及。

催化信號放大（catlyzed signal amplification，CSA）法是應用一種放大試劑生物素化酪胺，與抗生物素蛋白鏈菌素-生物素-過氧化物酶復合物（streptavidin biotin-HRP）連接，在過氧化物酶作用下形成大量的生物素沉積物，再加入抗生物素蛋白鏈菌素-過氧化物酶復合物后，過氧化物酶與生物素沉積物形成大量的過氧化物酶聚合，聚合的過氧化物酶與顯色劑起反應。在第三步應用了SABC法的SABC-HRP復合物，第五步應用了LSAB法的SA-HRP復合物。

由于CSA法加入了催化信號放大試劑，使信號不斷放大，因此敏感性比EPOS一步法、EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB（S-P）法和SABC等方法高。特別適用于檢測較弱的組織抗原。