輕松純化His標簽胞外分泌蛋白

從真核細胞上清液中純化蛋白是一項繁瑣的工作。通常情況下胞外分泌蛋白的濃度很低，且蛋白很容易被細胞上清液中的蛋白酶降解。
 
當然，Cube Biotech實驗室也面臨同樣的問題。然而一天，Cube Biotech的科學家想到是否我們可以把磁珠直接加入溶液，從平衡體系中分離出帶His標簽的蛋白？通過嘗試，整個純化過程變得比以前更加容易。因此，我們開發了一個新的方法來純化分泌在胞外的His標簽蛋白。
 
當然，新的方法能夠成功也是因為Cube Biotech所有的親和純化磁珠：NTA，IDA，和新的INDIGO系列產品都可以通過高溫蒸汽滅菌鍋處理。有興趣嘗試我們新方法用于下一次表達的His標簽胞外分泌蛋白？請參看我們如下的操作流程。
 
 

1、拿一小瓶PureCube His標簽親和磁珠（Ni-INDIGO、Ni-NTA、Ni-IDA）移去保護液并添加同體積PBS后用高溫蒸汽滅菌處理。

2、在培養瓶中裝入細胞培養液并接種細胞。

3、在培養瓶中加入高溫蒸汽處理過的100μl（25%含量）的磁珠到50ml培養液中。磁珠用量也可以通過蛋白表達量來計算。

4、在培養瓶外貼上磁鐵后按照通常的方法培養細胞。當帶His標簽的蛋白分泌到上清液后將會被磁珠捕獲。

5、需要收集蛋白時，將培養液取出并用清洗液清洗固定在培養瓶壁上的磁珠。

6、去掉磁鐵后將磁珠轉移到一個干凈的小管內。

7、加入洗脫液反應后將洗脫液轉移到另一個干凈的小管內。

8、洗脫液中含有純化出的帶His標簽的目標蛋白。