S100B蛋白ELISA試劑盒使用說明

德國DRG原裝進口，貨號：EIA5169

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預期用途

此試劑盒用于人血清和血漿中S100B濃度的檢測，僅用于實驗室

實驗原理

此試劑盒基于兩抗體與S100B結合，一個抗體固定在包被板上，另外一個則被HRP標記。試驗基于兩步法，每次洗板后，結合的和游離的就會分離，底物液TMB加入，會發生顏色變化，終止液加入終止反應，吸收值檢測。樣品中的S100B的濃度計算可從標準品著手。顏色強度與樣品中的S100B的濃度成正比

試劑盒組成

1.       S100B標準品，6支，凍干粉，STD0-STD5

2.       質控品，2支，凍干粉，陰性質控和陽性質控

3.       酶聯物緩沖液，1支，20ml，Tris緩沖液，BSA10g/L,0.05%吐溫

4.       酶聯物，1支，1ml，HRP標記的抗S100B

5.       試驗緩沖液，1支，12ml，Tris緩沖液，BSA10g/L，穩定劑

6.       包被板，可拆，包被有抗S100B

7.       TMB底物液，1支，15ml，H₂O₂-TMB 0.25g/L，避免皮膚接觸

8.       終止液，1支，15ml，0.15mol/L硫酸，避免皮膚接觸

9.       洗滌濃縮液，50X，1支，20ml，NaCl 45g/L,吐溫20 55g/L

實驗所需但試劑盒未提供

1.       去離子水

2.       自動移液器

3.       酶標儀

注意：所有試劑應保存在黑暗處2-8℃，微孔板平衡至室溫方可打開包裝，使用完后立即密封，不要移去未用板條的粘合條

注意事項

1.       試劑內含有硫柳汞防腐劑

2.       配制和吸取試劑時應按最高精確度要求操作

3.       所有試劑都有各自的批號，不要混用不同批次內的物質

4.       S100B的檢測范圍為10-5000pg/ml

5.       標準品的具體濃度見瓶上標簽

6.       不要使用嚴重溶血樣品

7.       避免底物液暴露在陽光，金屬或氧化劑下

操作步驟

樣品準備

S100B檢測可使用人血清或血漿，不要使用溶血樣品，樣品可在2-8℃下保存1天，更長的保質期的話可放置在-20℃，避免反復凍融，不要將樣品放置在室溫下的時間過長，樣品濃度高于5ng/ml時，應用試驗緩沖液進一步稀釋

標準品和質控品的準備

用1ml的去離子水配制標準品和質控品，可保存于2-8℃下4周，-20℃6個月，建議分裝保存于-20℃。標準品濃度見標簽。避免反復凍融和長時間暴露在室溫下

酶聯物的準備

使用前2小時準備

50ul的酶聯物+1.0ml的酶聯緩沖液（稀釋的酶聯物的量與試驗樣本量成正比），混合5min，避免氣泡產生，室溫下（22-28℃）可保存3小時

洗滌液準備

10ml的洗滌濃縮液+490ml的去離子水；不同的體積但保持同一稀釋比例；室溫下（22-28℃）可保存至標簽上所示的有效期

實驗步驟

建議做雙份檢測，包括標準品，質控品和樣品，還有一個空白對照孔

試劑	標準品	樣品/質控	空白對照
標準品S0-S5 質控	50ul
樣品/質控		50ul
試驗緩沖液	50ul	50ul
室溫下孵育2小時，棄去孵育液，每孔加300ul的洗滌液洗板6次
稀釋的酶聯物	100ul	100ul
室溫下孵育1小時，棄去孵育液，每孔加300ul的洗滌液洗板6次
TMB底物液	100ul	100ul	100ul
黑暗處，室溫下孵育30min
終止液	100ul	100ul	100ul
輕輕搖動微孔板，酶標儀上讀數（450nm）

結果計算

1.       計算每一標準品和樣品的平均OD值

2.       以標準品吸收值和濃度繪制一最合適的標準曲線（三次回歸或四參數）

3.       從標準曲線上可直接讀取樣品濃度

 

附：采用全自動酶標儀檢測，只需檢測前設置好酶標儀的相關參數，如坐標參數（線性，半對數）和計算方式參數（三次回歸、四參數或雙對數曲線方程），即可直接得到結果

 

 

 

 

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