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腺病毒 IgM ELISA試劑盒使用說(shuō)明

瀏覽次數(shù)：1789　發(fā)布日期：2011-10-27　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

腺病毒 IgM ELISA試劑盒

（德國(guó)IBL：RE56581）

1、應(yīng)用范圍

此酶免試劑盒可用于人血清和血漿中抗腺病毒IgM抗體的定性和定量檢測(cè)。

2、前言說(shuō)明

腺病毒是人和動(dòng)物體內(nèi)普遍存在的一種病原體，可分為許不同的血清型。腺病毒是一種常年存在所有人群中的地方性疾病。這種傳染病可以通過(guò)空氣傳播，也可通過(guò)塵埃傳播。腺病毒主要感染呼吸道黏膜和腸道黏膜，也會(huì)感染角膜。它們主要集中于上皮細(xì)胞和局部附屬淋巴結(jié)。腺病毒可引起各種已知的呼吸道病毒性疾病：呼吸道疾病、肺炎、與游泳池相關(guān)的咽結(jié)膜炎高燒和角膜結(jié)膜炎流行病。腺病毒的腸內(nèi)感染主要出現(xiàn)在小于一歲的小孩中。它主要特點(diǎn)是出現(xiàn)流行性急性腸胃炎，通常是由腺病毒40和41引起的。分離腺病毒或血清學(xué)檢測(cè)可以檢測(cè)是否急性腺病毒感染。腺病毒的血清學(xué)檢測(cè)特別重要，因?yàn)樗纱_定病人是否是急性腺病毒感染，另外它也用于大型流行病學(xué)的調(diào)查研究。ELISA主要測(cè)抗六聯(lián)體成分上群特異性決定簇的抗體。建議用于檢測(cè)特異性抗體的檢測(cè)方法有：血凝抑制和血清中和實(shí)驗(yàn)。由于腺病毒到處都存在以及相關(guān)血清型之間的交叉反應(yīng)，為了確定感染，可使抗體濃度提高4倍或更高的血清轉(zhuǎn)化就很有必要了。在血清學(xué)檢測(cè)中，IgG是主要被檢測(cè)的抗體。

3、實(shí)驗(yàn)原理

此固相ELISA試劑盒利用的是夾心法。包被孔中包被了抗原。用對(duì)IgM具有特異性的酶標(biāo)二抗來(lái)檢測(cè)結(jié)合到包被抗原上的樣品特異性抗原。底物反應(yīng)后，所顯示的顏色強(qiáng)度與IgM特異性抗體的濃度成正比。樣品的結(jié)果可直接用標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得。

4、試劑盒組成：

4×2ml	標(biāo)準(zhǔn)品A-D	1；10；40；150U/mL，待用標(biāo)準(zhǔn)品A=陰性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品B=臨界質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品C=弱陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品D=陽(yáng)性質(zhì)控內(nèi)含抗腺病毒的IgM抗體，PBS（磷酸緩沖液），穩(wěn)定劑。
1×14ml	酶標(biāo)IgM	紅色，待用。內(nèi)含過(guò)氧酶標(biāo)記的抗人IgM，蛋白緩沖液，穩(wěn)定劑。
1×12×8	包被板	可拆，包被有特異性抗原。
1×14ml	TMB底物液	含TMB
1×14ml	TMB終止液	0.5M的H₂SO₄
1×60ml	稀釋液	含PBS緩沖液，＜0.1%NaN₃
1×60ml	濃縮洗滌液	濃縮型（10×），含PBS緩沖液，吐溫20
2×	粘性金屬板	用于在溫育時(shí)遮蓋包被板
1×	塑料袋	用于儲(chǔ)存不用的板條

5、實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒不提供

1) RF吸附劑

2) 移液器，體積：5；50；100；500 µL

3) 校準(zhǔn)儀

4) 樣品稀釋用試管（1ml）

5) 帶試劑儲(chǔ)器8道移液器

6) 洗滌瓶，自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)

7) 能在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

8) 雙蒸水或去離子水

9) 吸水紙，取樣吸頭和計(jì)時(shí)器

6、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說(shuō)明

6.1成分準(zhǔn)備

稀釋/溶解	成分		稀釋液	比例	備注	貯存	穩(wěn)定性
60ml	洗滌液	加600ml	雙蒸水	1：10	加熱至37°C以溶解結(jié)晶，充分混合	2-8°C	8周

6.2樣品稀釋

樣品	稀釋	稀釋液	比例	備注
血清/血漿	全部稀釋	稀釋緩沖液	1：101	例：5µL+500µL

6.3用RF吸附劑處理：

注意	為了避免特異性IgG和類風(fēng)濕因子的干擾，病人的血清應(yīng)當(dāng)用RF吸附劑處理(RE59059)。標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品千萬(wàn)不要用RF吸附劑處理。
1.	在400µL按1：101的比例稀釋的樣品中加入20µL RF吸附劑。充分混合。
2.	室溫（18-25℃）下溫育≥1min（＜15min）

為了避免吸附特異性抗體，應(yīng)當(dāng)避免溫育時(shí)間＞15min。

預(yù)處理的樣品可能會(huì)是渾濁的。

7、實(shí)驗(yàn)步驟：

1) 加100µL標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品或已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中，在定性檢測(cè)中只使用標(biāo)準(zhǔn)品B。

2) 封板后室溫（18℃-25℃）溫育60分鐘。

3) 移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。

4) 在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。

5) 封板后室溫（18℃-25℃）溫育30分鐘。

6) 移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時(shí)，如果有條件的話，可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時(shí)間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。

7) 每孔加TMB底物液100µL。

8) 室溫（18℃-25℃）避光溫育20分鐘。

9) 在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動(dòng)包被板以使試劑混合均勻。此時(shí)，顏色藍(lán)色變成黃色。

10) 加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm處測(cè)OD值。

8、結(jié)果計(jì)算

在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動(dòng)生成的方法，以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸，濃度為X軸，繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對(duì)數(shù)圖或?qū)?shù)-對(duì)數(shù)圖都可獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，用標(biāo)準(zhǔn)品的每一單值進(jìn)行計(jì)算（樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉，應(yīng)使用更加合理的單值）。樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得。一旦樣品稀釋了，就應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測(cè)得的濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說(shuō)明所述對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，并重新檢測(cè)。

9、結(jié)果判定：＞ 12 U/ml 為陽(yáng)性,8 - 12 U/ml 為可疑,＜ 8 U/ml 為陰性

此檢測(cè)結(jié)果并不是任何治療結(jié)果判定的唯一因素，它應(yīng)當(dāng)結(jié)合臨床觀察和診斷結(jié)果加以判斷。

本譯文僅供參考，詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。

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標(biāo)簽：腺病毒德國(guó)IBL

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