組胺ELISA試劑盒使用說明

（德國IBL：RE59221）

此試劑盒可用于人血漿和尿液中組胺的體外定量檢測。深化此實驗可用于細胞培養(yǎng)上清液的研究。

組胺（β-咪唑乙胺）是人體中最重要的介質(zhì)，它主要存在于過敏反應(yīng)的起始階段（速發(fā)型過敏）。組胺是由組胺酸經(jīng)脫氨基作用產(chǎn)生的。組胺幾乎存在于機體的所有組織中，主要儲存于柱狀細胞和嗜堿性粒細胞的異染性顆粒中。組胺通常都是以無活性的復(fù)合體性存在，只有當(dāng)需要的時候才會釋放。像其它的介質(zhì)一樣，組胺不僅能調(diào)節(jié)過敏反應(yīng)的各種臨床癥狀，也可以調(diào)節(jié)終止過敏反應(yīng)的一系列效應(yīng)。組胺在組織中的生物活性是通過三種受體來完成的，它們分別是H1，H2和H3受體。臨床檢測組胺的方法有：定量檢測各種速發(fā)型過敏反應(yīng)中嗜堿性白細胞釋放組胺的量，也可以檢測過敏藥物治療后各種體液（血漿，尿液，細胞培養(yǎng)上清）中組胺的量。

   此ELISA試劑盒利用的是競爭法的原理。樣品中未知量的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競爭性結(jié)合到包被在微孔中的抗體結(jié)合位點上。溫育后洗板以終止競爭反應(yīng)。加入底物液后，溶液所顯示的顏色強度與樣品中抗原的量成反比。樣品的實驗結(jié)果可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接獲取。

試劑盒必須在2-8℃的環(huán)境下運輸和儲存，避免太陽直射。樣品的儲存與穩(wěn)定性及試劑準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。如果將包被板密封并儲存于2-8℃的環(huán)境下時，試劑在有效期內(nèi)穩(wěn)定。

按照靜脈穿刺的常規(guī)注意事項采集樣品，血液樣品自采集到實驗時都必須保證其化學(xué)完整性。不要使用明顯溶血、黃疸和脂血樣品。混濁的樣品應(yīng)當(dāng)在實驗開始前離心以除去所有的顆粒性物質(zhì)。
儲存	2-8℃	≤-20℃	≤-70℃	避免太陽直射，避免反復(fù)凍融。
穩(wěn)定性	5小時	3個月	2年

實驗必須使用自然產(chǎn)生的尿液，也可使用24小時內(nèi)產(chǎn)生的尿液。收集病人24小時內(nèi)產(chǎn)生的尿液，并混合于含10-15ml 6N HCl防腐劑的容器中。為了計算結(jié)果，請確定尿液的總體積。實驗開始前請先將樣品離心。
	自然的尿液	酸化尿液		避免太陽直射，避免反復(fù)凍融。
儲存	2-8℃	2-8℃	≤-20℃
穩(wěn)定性	8小時	3天	6個月

使用細胞培養(yǎng)上清作樣品，一般沒特殊注意事項 細胞培養(yǎng)基內(nèi)的組胺濃度可能稍微要高些。

全血中組胺釋放量的檢測必須用肝素化全血，具體信息請見相應(yīng)的說明書（RE95000）

注意：試劑盒有足夠做96份單孔檢測或48份雙孔檢測所需的試劑成分

數(shù)量	標(biāo)記	成分
1×12×8	MTP	包被板，可拆，微孔中包被了羊抗兔抗血清。
1×5ml	ANTISERUM	組胺抗血清，藍色，即用，內(nèi)含：兔抗血清、Tris緩沖液和0.01%的硫柳汞
1×75ul	ENZCONJ CONC	酶聯(lián)物，200倍濃縮，內(nèi)含辣根過氧酶標(biāo)記的組胺。
7×0.4ml	CAL P A-G  LYO	血漿標(biāo)準(zhǔn)品A-G，凍干，用于血漿樣品的定標(biāo)。內(nèi)含：組胺、人血漿。具體濃度請見試劑瓶標(biāo)簽或質(zhì)控單。
2×0.4ml	CONTROL P1+2 LYO	血漿質(zhì)控1+2，凍干，內(nèi)含：組胺、人血清。具體濃度及可允許范圍請見試劑瓶標(biāo)簽。
1×2.0ml 5×0.25ml	CAL U/C A-F	尿液/細胞培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)品A-F，0;2.7;8.1;24.3;73;219ng/ml,即用，用于尿液和細胞培養(yǎng)樣品的定標(biāo)。內(nèi)含：組胺和0.1M的HCl。
2×0.25ml	CONTROL U/C 1+2	尿液質(zhì)控1+2，即用，內(nèi)含：組胺、人尿液（酸化的）。具體濃度及可允許范圍請見試劑瓶標(biāo)簽。
1×2.25ml	ACYLREAG	酰化試劑，即用，內(nèi)含：DMF
1×60ml	ASSAYBUF CONC	檢測緩沖液，5倍濃縮，內(nèi)含Tris緩沖液、吐溫、BSA和0.05%的硫柳汞。
1×50ml	WASHBUF CONC	洗滌液，20倍濃縮，內(nèi)含磷酸緩沖液、吐溫和0.1%的硫柳汞。
1×10ml	INDICATORBUF	指示緩沖液，紫色，即用，內(nèi)含：Tris緩沖液、苯酚（pH＜7.5時顏色會發(fā)生改變＝和0.1%的硫柳汞。
1×12ml	TMB SUBS	TMB底物液，即用，內(nèi)含TMB、緩沖液和穩(wěn)定劑。
1×12ml	TMB STOP	TMB終止液，即用，1M的H2SO4。
3×	FOIL	粘性金屬板

1）移液器，體積：10;20;50;100;1000ul

2）試管（12×75mm）

3）試管架

4）振蕩器

5）旋渦混合器（500rpm）

6）帶儲器的8道移液器

7）洗滌瓶，自動或半自動洗板機

8）酶標(biāo)儀（參考波長：600-650nm）

9）蒸餾水或去離子水

10）            吸水紙、取樣吸頭和計時器

8.1凍干或濃縮成分的準(zhǔn)備

(*)在稀釋前,確保塞子內(nèi)無殘留液體.

8.2樣品的稀釋

樣品中組胺濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)品的樣品,應(yīng)當(dāng)在酰化前用相應(yīng)的稀釋液稀釋,尿液樣品用0.1M的HCl,血漿樣品用樣品稀釋液（Cat.no. KEHP711）,試劑盒內(nèi)未提供。

8.3樣品的酰化

用試管準(zhǔn)備樣品

注意	不能血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線確定酰化尿液或細胞培養(yǎng)樣品中組胺的濃度,也不能用U/C標(biāo)準(zhǔn)曲線確定酰化血漿樣品中組胺的濃度.

8.3.1血漿

1	將血漿標(biāo)準(zhǔn)品、血漿質(zhì)控品和病人樣品分別100ul加入到相應(yīng)的試管中。
2	在每一試管中加入100ul指示緩沖液，旋渦混合。
3	在每一試管中加入20ul酰化試劑，加入酰化試劑后立即旋渦混合。
4	將試管蓋好，室溫（18-25℃）溫育30分鐘。
5	在每一試管中加入750ul已稀釋好的檢測緩沖液，旋渦混合。

8.3.2尿液，細胞培養(yǎng)上清

注意：酰化處理好的樣品可在2-8℃下存放一晚，-20℃環(huán)境下可存放2天。

實驗結(jié)果不能當(dāng)作任何治療結(jié)果的唯一原因，疾病的判斷還應(yīng)當(dāng)與其它臨床觀察和診斷檢測相結(jié)合。以下結(jié)果為正常人群的正常值（5%-95%），建議每個實驗室讀確定自己的正常值范圍：

血漿	尿液
	24小時尿液	自然產(chǎn)生的尿液
ng/ml	ug/d	ug/g肌酐酸
0.2-1.0	5-56	8-53

 

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)。

 

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