泌乳素(PRL) ELISA試劑盒使用說明

 泌乳素(PRL) ELISA試劑盒使用說明

(德國DRG：EIA1291)

1、實驗原理

   DRG公司的泌乳素酶免實驗是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實驗（ELISA）。反應板上的微檢測孔包被有能結合泌乳素分子上獨特抗原位點的單克隆抗體。一份含有內源性泌乳素的病人樣本在包被孔中與酶聯物進行孵育，該酶聯物是一種聯結有辣根過氧化物酶的抗泌乳素抗血清。孵育后，用洗滌液洗去未結合的酶聯物。結合上的辣根過氧化物酶的總量與樣本中泌乳素的濃度成正相關。加入底物溶液后，顯出的顏色強度與病人樣品中泌乳素的濃度成正比。

2、試劑盒成分

1)       微量反應板，1塊 ( 96孔) ，微孔中包被了抗泌乳素的單克隆抗體。

2)       酶聯物，11ml，辣根過氧酶標記的泌乳素抗血清。 

3)       底物液，11ml (TMB)

4)       標準系列，6支（凍干粉），濃度：0；5；20；50；100；200ng/ml

轉換系數（1ng/ml=21.1mUI/mL）

5)       終止液，0.5M的 H2SO4，6ml

3、實驗需要器材（但試劑盒不提供）

1)       酶標儀(450±10nm)。

2)       移液器

3)       吸水紙

4)       標準水箱

5)       蒸餾水

6)       計時器

4、試劑貯存:

   未開啟的試劑在2—8℃下貯存，在有效期內可以保持活性。不要使用過期試劑，酶聯物、底物溶液、標準品和零標準品必須在2—8℃下貯存。

   微孔反應板必須在2—8℃下貯存。一旦包裝袋被打開，必須將它小心地嚴封起來。如果包被板的包裝被打開，其免疫活性在2個月內穩定，但前提是必須將它密封在裝有干燥劑的袋子里。

5、樣品的采集

1)       靜脈穿刺采集全血，待其凝血，在室溫下用離心機分離血清，避免溶血。注意：此試劑盒只能使用沒用任何添加劑的樣品。

2)       必須蓋住樣本并在實驗之前于２-８℃下可貯存48小時。樣品需要更長的貯存時間，則應將樣品凍存于-20℃的環境下。解凍的樣本在檢測之前必須上下倒置幾次。

注意：用于此試劑盒的樣品不能含有任何添加劑。

6、試劑的準備

參考標準：在凍干的標準品中加入1.0ml雙蒸水。

注：配制好了的標準品可在2-8℃下穩定存放2個月。想要存放更長時間應當將其凍存于-20℃的環境下。

7、一般注意事項

1)       實驗開始前，將所有試劑和樣本都平衡至室溫,試劑混合時避免起泡。

2)       實驗一旦開始,所有的步驟應完整地進行下去。

3)       每一樣品的取樣都得使用新的取樣吸頭。

4)       吸光度與溫育時間和溫度有關，在實驗開始后所有的試劑都應準備好，以保證加液時間的一致。

5)       本試劑盒最大吸光度(OD)在1.200-2.000之間(室溫22℃,顯色10分鐘以內)。如果最大OD值高于您酶標儀的上限或低于1.000，則相應的減少或延長顯色反應的溫育時間。一般情況下，酶免反應的強度與時間和溫度成線性，這使得操作者應當適當的調整物理化學環境。

8、實驗步驟

1)       將所需數目的板條置于板架上。

2)       將黃體生成素標準系列(0；5；20；50；100；200ng/ml)、質控和血清樣本分別25μl加入到相應的微孔中，每一樣品都得使用新的取樣吸頭。

3)       加100μl的抗泌乳素酶聯物于各孔中。

4)       混勻10秒,此步驟中完全混勻很重要。

5)       室溫溫育(22℃)30分鐘。

6)       棄去孔內的反應液。

7)       用蒸餾水洗板5次。

8)       在吸水紙上把板拍干。

9)       依原先加樣順序,每孔加100μl底物液。

10)   室溫(22℃)溫育10分鐘。

11)   按加底物液順序,每孔加50μl終止液于各孔中。

12)   10分鐘內在450±10nm波長讀吸光度。

9、結果計算

1)       計算每個標準品、質控品和病人樣本的平均吸光度值。

2)       用吸光度值作為縱坐標（y），濃度值作為橫坐標（x），以每個標準品的吸光度值對其相應的濃度值（mIU/ml）進行標繪，作一條標準曲線。

3)       用每一樣品的平均吸光度值在標準曲線上確定其相應的濃度。根據自己的實際經驗或計算機的功能，也可以采用其它的歸納方法進行計算。

4)       如果樣本的濃度高于最高濃度的標準品的濃度或者濃度＞200ng/ml，則需要進行稀釋，任何稀釋了的樣品在計算時都必須將相應的稀釋因子考慮進去。

10、參考值

我們強烈建議各個實驗市都建立自己的正常值和異常值。以下結果是以一定量正常人群的血液樣本為準得出的實驗結果：

靈敏度: 最小檢測出的泌乳素濃度為0.35ng/ml

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。

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