SILAC

SILAC(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture)也叫AACT(amino acid-coded mass tagging)屬于體內(nèi)標(biāo)記技術(shù)。在細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)，利用含輕、中或重型同位素標(biāo)記的必須氨基酸培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞來(lái)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新和成的蛋白質(zhì)，一般培養(yǎng)5-6代，細(xì)胞中的蛋白質(zhì)將被同位素標(biāo)記。

技術(shù)原理

SILAC方法通過(guò)“重型”13C-或15N-標(biāo)記的氨基酸在體內(nèi)代謝過(guò)程中摻入到蛋白質(zhì)中，等量混合各類(lèi)型同位素氨基酸標(biāo)記的蛋白質(zhì)樣本,酶解后進(jìn)行質(zhì)譜分析，通過(guò)比較一級(jí)質(zhì)譜圖中各類(lèi)型同位素標(biāo)記質(zhì)譜峰型的面積大小進(jìn)行相對(duì)定量，同時(shí)利用二級(jí)譜圖鑒定蛋白質(zhì)。

技術(shù)流程

技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1.標(biāo)記效率幾乎100%,比體外標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記效率高；
2.避免了樣本處理過(guò)程中引入的誤差；
3.所需樣本明顯少于體外標(biāo)記。

應(yīng)用領(lǐng)域

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床診斷疾病機(jī)理機(jī)制、個(gè)性化治療等；

生物醫(yī)藥：藥物作用機(jī)理，藥效評(píng)價(jià)，藥物開(kāi)發(fā)等

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