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多個(gè)樣品混合后同時(shí)進(jìn)行分離、酶切和鑒定,體內(nèi)標(biāo)記技術(shù),標(biāo)記效率高達(dá)99%。
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技術(shù)簡介
SILAC即細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)(Stable isotope labeling with amino acidsin cell culture,SILAC),其基本原理是采用輕、重穩(wěn)定同位素標(biāo)記的賴氨酸/精氨酸進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞經(jīng)傳代培養(yǎng)6代后,細(xì)胞97%以上的蛋白質(zhì)將被輕、重穩(wěn)定同位素標(biāo)記。等量混合標(biāo)記穩(wěn)定同位素標(biāo)記的蛋白質(zhì),酶解后,進(jìn)行質(zhì)譜分析。SILAC標(biāo)記技術(shù)是體內(nèi)標(biāo)記技術(shù),且不影響細(xì)胞的功能,靈敏度高,廣泛應(yīng)用于比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究中。
技術(shù)優(yōu)勢
l 多個(gè)樣品混合后同時(shí)進(jìn)行分離、酶切和鑒定,后續(xù)試驗(yàn)對樣品的影響是一致的,減少了試驗(yàn)操作和儀器設(shè)備引入的實(shí)驗(yàn)誤差。
l 體內(nèi)標(biāo)記技術(shù),標(biāo)記效率高達(dá)99%。
l 定量線性范圍廣,尤其對相對差異較大的蛋白定量精確。
l 可以對多種在DMEM、DMEM-F12,1640三種培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。
l 該技術(shù)屬于體內(nèi)標(biāo)記,其標(biāo)記效率不受裂解液成分的影響,標(biāo)記效果穩(wěn)定。
實(shí)驗(yàn)流程


送樣標(biāo)準(zhǔn)
l 細(xì)胞能夠在補(bǔ)充透析胎牛血清的DMEM, DMEM/F12, 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
l 景杰負(fù)責(zé)細(xì)胞培養(yǎng):
請將細(xì)胞培養(yǎng)瓶灌滿培養(yǎng)基,在4度環(huán)境中運(yùn)送。
培養(yǎng)過程中需要的特殊試劑由客戶提供,或由我們代購。
l 客戶負(fù)責(zé)細(xì)胞培養(yǎng):
客戶在標(biāo)記6代后,需要提供少量細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記效率檢測。達(dá)到97%以上方可放大培養(yǎng)。
客戶需提供50ul以上細(xì)胞沉淀。
l 從培養(yǎng)基中收集細(xì)胞后,請用4度預(yù)冷PBS洗滌三次,細(xì)胞沉淀-80度保存,干冰運(yùn)送。