檢測(cè)激素的ELISA試劑盒類(lèi)型、特點(diǎn)及原理

ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，利用酶標(biāo)記的抗體或抗原，通過(guò)酶催化的顯色反應(yīng)檢測(cè)目標(biāo)分子（如蛋白質(zhì)、抗體、激素等）的存在和含量。

基本原理：
1、抗原-抗體特異性結(jié)合：利用抗體識(shí)別特定抗原，或抗原結(jié)合特定抗體。可以分為直接法、間接法、夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法；
2、酶標(biāo)記和顯色反應(yīng)：結(jié)合特定酶（如辣根過(guò)氧化物酶HRP或堿性磷酸酶AP），通過(guò)底物反應(yīng)產(chǎn)生可檢測(cè)的顏色變化；
3、定量分析：通過(guò)比色法測(cè)定光吸收值，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，計(jì)算待測(cè)物的濃度。

檢測(cè)激素的ELISA試劑盒類(lèi)型

樣本處理：
血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或 4℃過(guò)夜，然后 1000×g離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

血漿：用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于 2-8℃1000×g離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS （0.01M,pH=7.4）沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱(chēng)重后將組織碎。將碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的 PBS（一般按 1：9 的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對(duì)應(yīng) 9mL 的 PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于 5000×g離心 5~10 分鐘，取上清檢測(cè)。

細(xì)胞裂解液：貼壁細(xì)胞用預(yù)冷 PBS 輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g 離心 5 分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì)胞可直接離心收集。收集的細(xì)胞用預(yù)冷PBS 清洗 3 次，每 1×10^6 個(gè)細(xì)胞中加入 150-200uL PBS 重懸（推薦在PBS 中加入蛋白酶抑制劑；若含量很低可適當(dāng)減少 PBS 體積）并通過(guò)反復(fù)凍融或超聲使細(xì)胞破碎。將提取液于 2-8℃，1500×g 離心 10 分鐘，取上清檢測(cè)。

細(xì)胞培養(yǎng)上清：請(qǐng) 1000×g離心 20 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

其它生物液體：1000xg離心 20分鐘，取上清即可檢測(cè)。

ELISA試劑盒特點(diǎn)：
1、可測(cè)樣本類(lèi)型多：血清、血漿、組織、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本；
2、高準(zhǔn)確度：回收率普遍在90%-115%之間；
3、高靈敏度：靈敏度達(dá)pg級(jí)別，R²大于99。

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