實(shí)驗(yàn)方法分享：基于圖像表型分析方法評(píng)估大麥對(duì)水淹脅迫的響應(yīng)與恢復(fù)

方法來(lái)源
Langan, P. et al. Evaluating waterlogging stress response and recovery in barley (Hordeum vulgare L.): an image-based phenotyping approach. Plant Methods 20, 146 (2024).
 
研究單位

• 愛(ài)爾蘭都柏林大學(xué)
• 法國(guó)亞眠大學(xué)

 
關(guān)鍵儀器裝備
PlantScreen溫室高通量植物表型成像分析系統(tǒng)
 
      PlantScreen溫室高通量植物表型成像分析系統(tǒng)是植物科學(xué)研究全面、自動(dòng)化、高通量的表型解決方案，能夠?qū)�從模式植物擬南芥到小麥、玉米等作物的全方位表型性狀進(jìn)行長(zhǎng)期、無(wú)損的監(jiān)測(cè)與分析。
      系統(tǒng)分布于世界各大洲的頂尖科研機(jī)構(gòu)、大學(xué)及知名農(nóng)業(yè)企業(yè)。如荷蘭植物生態(tài)表型中心/荷蘭瓦格寧根大學(xué)（注：鏈接為專題報(bào)道，下同）、德國(guó)萊布尼茨植物遺傳和作物研究所（IPK）、芬蘭赫爾辛基大學(xué)、澳大利亞國(guó)立大學(xué)、中國(guó)農(nóng)科院生物技術(shù)研究所、中國(guó)水稻所等全球知名的農(nóng)業(yè)學(xué)府和頂級(jí)研究機(jī)構(gòu)，以及杜邦先鋒、孟山都、巴斯夫等農(nóng)業(yè)巨頭公司。  
研究背景
      隨著氣候變化，許多地區(qū)的降雨頻率增加，水淹脅迫成為影響大麥產(chǎn)量的一個(gè)重要限制因素。水淹脅迫對(duì)作物產(chǎn)量的影響因作物種類、管理措施、遺傳多樣性以及脅迫條件而異。水淹會(huì)導(dǎo)致土壤中氧氣不足，從而影響植物的生長(zhǎng)和發(fā)育。大麥?zhǔn)侨�球第四大作物，�?duì)水淹脅迫較為敏感。以往的研究中，水淹脅迫的處理方法和持續(xù)時(shí)間各不相同，這使得不同研究之間的結(jié)果難以比較。因此，本研究旨在通過(guò)圖像表型分析方法，確定一個(gè)最佳的模擬水淹脅迫的持續(xù)時(shí)間和設(shè)置，以便在控制條件下評(píng)估大麥的水淹耐受性。
 
研究目的
      本研究的主要目的是確定一個(gè)最佳的水淹脅迫實(shí)驗(yàn)方案，以便在控制條件下評(píng)估大麥的水淹耐受性，同時(shí)通過(guò)圖像表型分析方法來(lái)量化水淹脅迫對(duì)大麥生長(zhǎng)和綠色度的影響。
 
研究方法

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

      實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分，分別在愛(ài)爾蘭都柏林大學(xué)和法國(guó)亞眠大學(xué)進(jìn)行。選取了四種兩行春大麥品種，包括兩種商業(yè)品種（RGT Planet和Concerto）和兩種傳統(tǒng)品種（Glasnevin no.5和Golden Promise）。實(shí)驗(yàn)1在都柏林大學(xué)進(jìn)行，測(cè)試了兩種品種（RGT Planet與Glasnevin no.5）、六種不同的水淹脅迫持續(xù)時(shí)間和恢復(fù)時(shí)間組合，包括5天、10天和14天的脅迫，以及有無(wú)7天恢復(fù)期。實(shí)驗(yàn)2在法國(guó)亞眠大學(xué)進(jìn)行，驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)1中選定的最佳方案（14天脅迫加7天恢復(fù)）的可重復(fù)性，并增加了兩種品種和樣本數(shù)量（重復(fù)數(shù)量從5個(gè)增加至10個(gè)）。

• 脅迫處理

      在三葉期（即Zadoks 13）對(duì)大麥?zhǔn)┘铀�淹脅迫，通過(guò)將花盆置于一個(gè)密封排水孔的外盆中，使水位保持在土壤表面以上約1厘米處，對(duì)應(yīng)于大約120%的田間持水量。對(duì)照組的花盆排水孔未密封，保持在大約60%的田間持水量。在實(shí)驗(yàn)2中，水位保持在大約140%的田間持水量，對(duì)照組保持在大約100%的田間持水量。不同水分處理通過(guò)PlantScreen™高精度自動(dòng)灌溉系統(tǒng)每日08:30監(jiān)測(cè)并調(diào)控，系統(tǒng)以目標(biāo)重量為基準(zhǔn)實(shí)現(xiàn)定量補(bǔ)水。

• 圖像表型分析

      使用PlantScreen™成像平臺(tái)，每天從頂部和側(cè)面拍攝RGB圖像，以量化水淹脅迫對(duì)生長(zhǎng)和綠色度的生理影響。通過(guò)圖像分析軟件PlantScreen™ Analyzer計(jì)算地上部投影面積（PSA，側(cè)視與俯視分割像素之和），以評(píng)估植物的生長(zhǎng)情況。此外，在實(shí)驗(yàn)2中，還進(jìn)行了FluorCam動(dòng)態(tài)葉綠素?zé)晒獬上瘢�以評(píng)估植物的光合性能。

• 根系成像和破壞性表型分析

      在實(shí)驗(yàn)1的每個(gè)處理結(jié)束時(shí)，對(duì)根系進(jìn)行手工清洗，并記錄根長(zhǎng)和干質(zhì)量。使用EPSON平板掃描儀和RhizoVision Explorer軟件獲取根系參數(shù)，包括長(zhǎng)度、體積、直徑和表面積。在成像最后一天，測(cè)定地上部莖長(zhǎng)、鮮重與干重。實(shí)驗(yàn)2中，在成像最后一天測(cè)定了地上部干重。
 
研究結(jié)果

• 最佳脅迫方案的確定

      實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著水淹脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，植物生長(zhǎng)的減緩更加明顯，并且這種影響在恢復(fù)期仍然持續(xù)。在實(shí)驗(yàn)1中，只有14天的脅迫（P5和P6）顯示出對(duì)照組和水淹組之間實(shí)際干質(zhì)量的顯著差異（圖3右E和F）。特別是包含7天恢復(fù)期的最長(zhǎng)處理（P6）在收獲時(shí)干質(zhì)量的變化最為顯著，且通過(guò)地上部投影面積PSA（指示地上部生物量）最能清晰區(qū)分基因型間的耐受差異（圖3左F），因此被選為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的最佳處理方案。

• 水淹對(duì)大麥生物量和光合性能的影響

      在實(shí)驗(yàn)2中，四種大麥品種在水淹脅迫下的生物量顯著減少，與對(duì)照組相比，水淹組的干質(zhì)量減少了約73%至81%。通過(guò)圖像分析，觀察到水淹脅迫下植物的PSA顯著降低，表明生長(zhǎng)受到抑制（圖4A）。
      葉綠素?zé)晒獬上耧@示，在脅迫期間，所有品種的Fv/Fm值（最大光化學(xué)效率）都有所降低，但在恢復(fù)期有所回升。特別是Golden Promise品種在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中Fv/Fm值的降低幅度最小，顯示出其對(duì)水淹脅迫的耐受性（圖4B）。

• 綠色度變化分析

      通過(guò)對(duì)圖像中的綠色度進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)水淹脅迫導(dǎo)致某些特定色調(diào)的像素?cái)?shù)量發(fā)生變化。具體來(lái)說(shuō)，較深的綠色調(diào)（Hue 2、3和4）在水淹植物中變得不那么明顯，而較淺的綠色調(diào)（Hue 7、8、9和10）以及最深的色調(diào)（Hue 1）在水淹脅迫下有所增加。這些變化在脅迫期間最為顯著，并在恢復(fù)期逐漸恢復(fù)正常（圖5）。因此，不同基因型大麥在水淹脅迫下葉片綠色色調(diào)的組成和動(dòng)態(tài)變化存在顯著差異，可作為快速、無(wú)損的耐淹性診斷指標(biāo)。 研究結(jié)論
      本研究通過(guò)圖像表型分析方法，確定了一個(gè)最佳的水淹脅迫實(shí)驗(yàn)方案（14天脅迫加7天恢復(fù)），該方案能夠顯著區(qū)分不同大麥品種對(duì)水淹脅迫的響應(yīng)。研究結(jié)果表明，水淹脅迫顯著降低了大麥的生物量和光合性能，并且通過(guò)綠色度分析可以觀察到植物對(duì)脅迫的適應(yīng)和恢復(fù)能力。此外，本研究還強(qiáng)調(diào)了在脅迫后包括恢復(fù)期的重要性，因?yàn)檫@有助于觀察植物在脅迫后的生長(zhǎng)恢復(fù)情況。通過(guò)高通量圖像表型分析，本研究提供了一種新的、可重復(fù)的評(píng)估大麥早期水淹耐受性的方法，有助于更精確地量化與水淹脅迫相關(guān)的標(biāo)記，如綠色度、Fv/Fm和PSA。
 
北京易科泰提供植物表型全場(chǎng)景技術(shù)解決方案

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