病毒親和層析介質(zhì)Diamond Viru-S 開啟病毒純化新思路

• 選擇性不足，雜質(zhì)去除有限

• 柱效下降快，拆裝柱頻繁

• 工藝周期長，放大受限

Bestchrom推出的病毒親和層析介質(zhì)Diamond Viru-S，正是為解決這些痛點(diǎn)而生。以特異識(shí)別取代非特異分離，帶來更快、更穩(wěn)、更高通量的病毒純化體驗(yàn)。

基于硫酸化多糖識(shí)別的廣譜親和機(jī)制

Diamond Viru-S采用高剛性Diamond瓊脂糖基架，結(jié)合糖酐硫酸鹽 (Dextran Sulfate) 配基構(gòu)成。

該配基屬于硫酸化多糖類結(jié)構(gòu)，其磺酸基團(tuán)（–SO₃⁻）可與病毒包膜蛋白表面富含陽離子氨基酸殘基（如Lys、Arg）通過靜電作用與氫鍵相互作用形成復(fù)合結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對多種帶膜病毒的選擇性吸附。

文獻(xiàn)研究表明，硫酸化多糖能夠通過與病毒包膜蛋白受體結(jié)合區(qū)域的陽離子位點(diǎn)發(fā)生靜電吸附，從而抑制或富集病毒顆粒（Front. Microbiol., 2019；Nature Biotechnol., 1993）。這種機(jī)制賦予Diamond Viru-S對多種病毒體系的廣譜結(jié)合能力，包括流感病毒、呼吸道合胞病毒 (RSV)、黃熱病毒、慢病毒載體等。

因此，Viru-S可用于病毒疫苗及病毒載體的捕獲與中度純化階段，在低反壓下實(shí)現(xiàn)高流速運(yùn)行，顯著提升工藝通量。

核心優(yōu)勢

• 高剛性，低反壓

支持高流速運(yùn)行，反壓低、裝柱簡便，適合大規(guī)模連續(xù)化操作。

• 廣譜親和力

對多種包膜病毒均具有相似親和性，一介質(zhì)即可適配多類型病毒或疫苗工藝。

• 優(yōu)異化學(xué)穩(wěn)定性

耐受NaOH清洗，可重復(fù)循環(huán)使用，延長填料壽命。

Diamond Viru-S不允許在高電導(dǎo)率下結(jié)合。原因在于在低離子強(qiáng)度溶液中，由于帶負(fù)電的硫酸根基團(tuán)的排斥，硫酸葡聚糖聚合物將會(huì)完全伸展；在高離子強(qiáng)度溶液中，聚合物會(huì)收縮并與去離子化葡聚糖更相似。

當(dāng)處理流感病毒時(shí)，建議導(dǎo)電率小于5 mS/cm, pH值建議在6.8~7.8之間。 裝柱完成后，在進(jìn)行純化操作前建議先進(jìn)行空白運(yùn)行，包括在位清洗(CIP)。用5CV的平衡緩沖液平衡柱子，直到柱流出物顯示穩(wěn)定的導(dǎo)電率和pH值。 

• 緩沖液：首選磷酸鹽緩沖液，pH范圍在中性6.8~7.8之間，如20mM磷酸鈉pH6.8；

• 流速：根據(jù)柱子的高度一般選用90~500cm/h的流速，柱高越大流速越慢； 

• 樣品準(zhǔn)備：為防止樣品堵塞柱子，在上樣前樣品需要用0.45μm的微孔濾膜過濾，并將樣品的pH和電導(dǎo)率調(diào)整到與平衡緩沖液一致，（可以采用稀釋、超濾以及用Bestdex G-25置換緩沖液的方式調(diào)整樣品的pH和電導(dǎo)率）；

• 平衡：用平衡緩沖液清洗層析柱至出口處的緩沖液的pH和電導(dǎo)率與平衡緩沖液基本一致，通常需要3~5倍柱床體積；

• 上樣：根據(jù)樣品中的物質(zhì)含量和Diamond Viru-S的結(jié)合載量確定上樣體積，進(jìn)行上樣；

• 清洗：用平衡緩沖液清洗掉未結(jié)合的樣品至紫外吸收接近基線；

• 洗脫：可以采用線性梯度或者步級(jí)梯度增加洗脫液中的洗脫強(qiáng)度，用洗脫緩沖液（如含有1.5 M NaCl的20mM磷酸鈉，pH7.4）洗脫病毒。

典型應(yīng)用

• 重組 RSV 疫苗純化

• 流感病毒疫苗純化

• 慢病毒載體濃縮與精純

結(jié)語

從離子交換到特異識(shí)別，從傳統(tǒng)層析到高效親和，Diamond Viru-S 以其高親和性、廣譜適應(yīng)性和可放大性能，為病毒純化工藝帶來更穩(wěn)健的解決方案。

Bestchrom，助力病毒純化邁向新階段。

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參考文獻(xiàn)

[1]Frontiers in Microbiology (2019) – Sulfated Polysaccharides and Their Interaction with Viral Envelope Proteins.

[2]Nature Biotechnology (1993) – Virus Harvesting and Affinity-Based Liquid Chromatography.

[3]Purolite Application Note (2023) – Affinity Chromatography for Viral Capture and Clarification.