微生物限度檢測膜過濾法介紹

微生物限度檢測是一種在生物制藥、醫療器械、化妝品企業、食品飲料、醫療疾控、第三方檢測、檢驗檢疫等單位機構中廣泛進行的，主要是用來評估藥品、食品飲料、生物制劑、化妝品、醫療器械等產品中微生物污染程度的質量控制方法�？梢詸z測樣品中需氧菌、霉菌、酵母菌總數，以及特定致病菌——如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等特定病原微生物的存在，目的是確保產品中的微生物數量在安全范圍內，避免對消費者和使用者健康造成危害。更具體的來講，在制藥行業，能確保無菌或微生物限度，符合中國藥典、美國FDA等各國藥品監督的要求；在食品飲料生產時，保障出廠的產品安全，防止微生物污染印發的健康風險；在化妝品企業，確保產品微生物指標符合衛生標準規范。
       
進行微生物限度檢測的主要幾種方法有以下幾種：
平皿計數法，直接通過培養基培養并計數微生物；
最可能數法，是通過統計方法估算微生物數量；
快速檢測法，如PCR、ATP生物發光法等，用于快速篩查；
膜過濾法，適用于液體樣品，過濾后培養并計數。
       
在上述幾種方法中，平皿法通常用于不可過濾的固體或高黏度樣品，或者少量的濾液（10ml以下）；最可能數法由于通過統計的方法估算的數值，結果準確度低。 目前使用最廣泛的是膜過濾法，其在微生物檢測中具有顯著優勢。其原理是將一定量的待檢測液體樣品，倒入過濾杯中，使用真空泵產生的負壓吸引力，使液體能通過濾膜，微生物被截留在膜上，然后將濾膜置于培養基上培養，最后計數形成的菌落。所以濾膜法能夠富集樣品中的微生物，即使微生物濃度很低（如1 CFU/100mL），也能通過增加過濾液體的總容量來提高檢測靈敏度。
     
在具體準備過濾裝置時，應當注意過濾裝置的聯數，聯數是指單次可以同時過濾的樣品數量。例如R300B單聯微生物檢測抽濾裝置，采用的是常規的上方過濾漏斗，連接底部集液瓶的結構形式，濾液通過濾膜后直接流入底部試劑瓶待實驗結束后處理，抽濾瓶帶有接口連接真空泵來進行抽氣形成負壓吸引力。單聯過濾裝置結構簡單，整體尺寸小巧，占用空間少，每次過濾一組樣品，較為適合檢測樣品量不大的用戶。
       
而針對大型企業，或者是疾控、第三方檢測等單位，由于檢測樣品數量多，如果每次只能過濾一組樣品，效率低下。這時候就可以使用多聯過濾系統，它是通過一組使用金屬材質制作的過濾支架，將多組過濾杯連接起來，使其可以通過同一臺真空泵來抽氣產生負壓吸力。典型的如BV-321-A三聯式和BV-621A六聯式微生物限度檢測真空抽濾系統，可以同時過濾3組或6組樣品。支架采用耐腐蝕的陽極鋁合金材質制作，對應插入3或6支過濾漏斗，漏斗中間放置濾膜。支架側邊帶有接口連接一個大容量的集液瓶，濾液通過濾膜后流入集液瓶內暫存，集液瓶底部帶快速排液口，瓶滿后松開排液管夾可以快速導出濾液，不需要停下工作打開集液瓶蓋的繁復操作。集液瓶的頂部有2個接口，一個連接支架、另一個接抽濾泵，這樣即可以實現1臺泵搭配1只集液瓶，同時處理數個過濾漏斗內的樣品，大幅提升過濾效率。
       
在選擇合適的機型后，具體進行檢測大致包含以下步驟：
1. 準備濾膜：選擇合適的濾膜并滅菌，也可以直接選購已經伽馬射線（輻照）滅菌的無菌包裝過濾膜。濾膜材質通常推薦使用MCE混合纖維素材料。直徑根據過濾裝置的漏斗大小來選擇，一般為47或50mm較為常見�？臻g根據需要檢測的微生物來覺得，一般為0.22或0.45微米。推薦使用帶網格線的過濾膜，便于計數時的觀察。
2. 過濾樣品：將液體樣品通過濾膜過濾，微生物被截留。具體根據選擇的過濾裝置型號參加說明書操作。
3. 轉移濾膜：將濾膜移至適當的培養基上。
4. 培養：在適宜條件下培養，使微生物生長。
5. 計數：培養結束后，計數濾膜上的菌落數。