大鼠Bcl2相關髓細胞白血病序列1/P1NP/SEMA3A ELISA試劑盒說明書

檢測原理如下，如需詳細說明書請聯系我們索取 
試劑盒采用雙抗體夾心法原理：將捕獲抗體包被于酶標板上，捕獲樣品及校準品中待測物，加入辣根過氧化物酶標記的酶標二抗，結合形成“抗體-抗原-抗體-HRP”免疫復合物，加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍色，加入終止液停止反應。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物含量呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣本中待測物的濃度。

包含的實驗材料實驗材料
名 稱                                   組成成分
酶標板                                預包被捕獲抗體的酶標板
校準品（10×）                   待測物 
酶標抗體（100×）           100倍濃縮HRP酶標記的檢測抗體
通用稀釋液（20×）          樣品/校準品/酶標抗體通用稀釋液
濃縮洗液（20×）             20倍濃縮洗液
顯色劑                              TMB、過氧化氫
終止液                              稀硫酸
如需單獨采購通用型組分，請提供對應的組分名稱。

試劑的準備及儲存
1×洗液的配制：濃縮洗液（20×）如有晶體析出，需在37℃下加熱至晶體全部溶解后使用。用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL濃縮洗滌液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。
1×通用稀釋液的配制：用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL的20×濃縮通用稀釋液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。
1×酶標抗體工作液的配制：100×酶標抗體用“1×通用稀釋液”按1:100倍稀釋，例如：10uL的（100×）酶標抗體加入990uL的“1×通用稀釋液”，混合均勻。配制好的1×酶標抗體工作液可以在2~8℃保存8h。
· 工作校準品的配制：校準品開封前應離心30秒，確保所有校準品集中于底部；
  準備7個離心管，將10×校準品按需吸取一定量用“1×通用稀釋液”稀釋10倍配制成校準品S1。例：50uL的10×校準品+450uL的“1×通用稀釋液”，制備得到500μL的S1濃度校準品。在隨后的6個離心管中分別加入250μL的“1×通用稀釋液”，在這6個試管中（S2~S7）將S1校準品依次倍比稀釋6個梯度至S7，共配制7個濃度的校準品，依次為：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如隨貨說明書中圖所示，“1×通用稀釋液”作為零濃度校準品S0，共8支校準品。 

實驗步驟
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右，也可置于37℃溫箱快速回溫至室溫。
注意：酶標板未恢復室溫前，請勿開封。
編號    檢測試驗需設置校準品孔、樣品孔，合理規劃各樣本的排布。
稀釋加樣    校準品孔：每孔加入校準品100uL，（S0-S7，共8個濃度）。
樣品孔：每孔加入樣品稀釋液80uL，再加入樣品20uL。*
測細胞：每孔加入細胞上清100uL。
溫育    蓋上封板膜，在37℃下孵育60分鐘
洗板    洗板3次，最后一次洗板后倒扣酶標板，在干凈的吸水紙上拍去殘液。
加酶    每孔加入100μL酶標抗體工作液。
溫育    蓋上封板膜，在37℃下孵育60分鐘。
洗板    洗板5次，最后一次洗板后倒扣酶標板，在干凈的吸水紙上拍去殘液。
顯色    每孔加入顯色劑100uL，37℃避光顯色15分鐘。
終止    每孔加終止液 50uL。
測定    使用酶標儀在450nm檢測波長及620~690nm參比波長條件下測定吸光度值，如果沒有參比波長則僅選擇450nm波長進行檢測。如果最高濃度校準品OD值過高，應立即在405/630nm雙波長條件下檢測。
* 樣品稀釋液50uL，加樣品50uL樣品稀釋倍數為2倍。
* 樣品稀釋液80uL，加樣品20uL，則稀釋倍數為5倍。
* 如樣本珍貴量少，可適當加大稀釋倍數，應當進行預實驗確定最佳稀釋倍數。

結果計算
雙波長檢測結果無需進行調0，可直接進行標曲擬合及結果計算。
以下曲線擬合方式均可使用，選擇擬合后r值最佳的擬合方式進行結果計算。
l 四參數邏輯（4-P）曲線擬合：以濃度值為橫坐標，吸光度值為縱坐標；
l 多項式曲線擬合：2次多項式、3次多項式；
l 雙對數直線擬合：以濃度值取對數，吸光度值取對數后，進行直線擬合；
l 點對點擬合：各相鄰點之間分別單獨進行線性擬合，分段計算；
推薦使用專業化軟件進行結果擬合和計算，如ELISACALC、SPSS、Graphpad Prism等。
**最終樣本濃度應乘上樣本的稀釋倍數。
曲線擬合方式示例圖，以下數據和曲線僅供示例，與本試劑盒測定結果無關。

檢測的局限性
樣本濃度超出檢測范圍上限時，應當進行適當加大稀釋倍數后再次檢測，計算結果應當乘上稀釋倍數。樣本濃度低于LOQ定量限時，檢測結果無法進行準確定量。

產品性能指標
以下結果基于校準品的濃度值實驗得出，未納入基質效應等其他因素的潛在影響。
精密度：板內精密度CV＜10%（N=20），板間精密度CV＜15%（N=20）。
特異性（Analytical specificity）：其他相關因子在稀釋緩沖液中測定，沒有觀察到明顯的交叉反應。