PBMC在免疫治療藥物研發中的應用熱點問題解答

—熱點問題—

第一題    CD4+T細胞加普通培養基可以培養幾天？

​經多次驗證，分選后的CD細胞在普通培養基中僅能維持24~48小時，且隨著時間的延長細胞活力和狀態都在不斷的下降。

第二題    PBMC可以在體外擴增嗎？

PBMC在沒有相關細胞因子存在情況下不能擴增。由于PBMC是一群混合細胞，即使添加了細胞因子也只能是某些亞型細胞的擴增，最終導致PBMC細胞組成比例發生改變。

第三題    分選后的細胞想要培養，應該選擇什么培養基？普通1640是否可以？

不同亞型免疫細胞擴增需要在基礎培養基中添加不同的細胞因子或細胞因子組合，基礎培養基可選用1640培養基。為滿足客戶的不同需求，IPHASE正在陸續推出不同亞型細胞的擴增、分化培養基，敬請期待！

第四題    凍存PBMC，復蘇后細胞亞群比例會改變么？

凍存PBMC復蘇后細胞亞群比例是否改變與凍存液的凍存效果有關。凍存效果好的凍存液細胞凍存復蘇后活率高，則細胞亞群比例不會發生顯著改變。IPHASE推出的PBMC凍存液細胞復蘇后活率＞90%，完全滿足后續實驗要求。

第五題    陽選，陰選，適配體分選如何選擇？

若靶抗原與磁珠偶聯抗體的持續結合不影響后續實驗，比如分選細胞用于RNA或蛋白的提取，則可以考慮陽選試劑盒。反之，則需要選擇陰選或IPHASE的適配體無痕分選試劑盒。IPHASE適配體無痕分選試劑盒分選后純度＞95%，且細胞不帶磁珠和與靶抗原結合的適配體分子，兼具有陽選試劑盒和陰選試劑盒的優點。

第六題    凍存PBMC能用于細胞分選試驗嗎？

IPHASE推出的分選試劑盒均可用于凍存PBMC的細胞分選。

第七題    我公司最近想開發PBMC質控品，想尋找一款凍存效果較好的凍存液，有推薦嗎？

IPHASE無血清細胞凍存液適用于您的需求，細胞復蘇存活率＞90%，得率＞85%，復蘇后細胞亞群比例不發生改變。

第八題    通過陽性分選試劑盒得到的細胞是否可通過流式細胞儀進行檢測？

通過陽性分選的方法得到的細胞與磁珠連接，但所使用磁珠為納米磁珠，理論上不影響流式細胞儀的檢測。如有疑慮，可嘗試使用培養外加反復吹吸的方式使得細胞和磁珠脫離后再進行流式檢測。需注意的是，流式抗體選擇請嚴格參照產品說明。

第九題    IPHASE的人PBMC進行HLA分型鑒定嗎？IPHASE的人PBMC供體庫有多大？

IPHASE的人PBMC均進行了HLA分型鑒定。IPHASE的人PBMC供體庫目前有近百個donor，庫容量正在逐漸增加，客戶可以從我們人PBMC供體庫中選擇適合自己實驗的PBMC。

第十題    凍存PBMC復蘇操作上應注意哪些細節？

首先，需要37℃預熱復蘇培養基。其次，水浴解凍細胞時要注意管內細胞融化狀態，當融化至少量冰晶時終止水浴。最后，離心力、離心時間需按隨貨說明書建議進行參數設置。

十一題    IPHASE人CD3/CD28+T細胞活化擴增試劑盒刺激細胞擴增最長時間是多少？

IPHASE人CD3/CD28+T細胞活化擴增試劑盒刺激細胞擴增我們只驗證到15天，擴增效率超千倍，此時細胞仍保持良好狀態，完全可以進一步延長時間進行擴增培養。

十二題    ​IPHASE提供的凍存人PBMC細胞有哪些規格？

IPHASE可提供凍存、新鮮兩種狀態的細胞，且包含5million/支，10 million/支，50 million/支等多種規格。