BSA雜質(zhì)殘留替代方案植物源重組人血清白蛋白的優(yōu)勢和應(yīng)用

在體外診斷（In Vitro Diagnosis，IVD）行業(yè)中，BSA（Bovine serum albumin）牛血清白蛋白一直是廣泛使用的原材料之一。在各大診斷方法，比如生化、化學(xué)發(fā)光、質(zhì)譜等檢測方法中發(fā)揮重要的作用。但BSA主要是通過牛血漿提取，血清中殘留的IgG、蛋白酶、激素、脂肪酸等物質(zhì)，即使經(jīng)過相關(guān)提純工藝，仍然會(huì)有微量的殘留，在一些血液樣本，尤其是微量樣本檢測時(shí)，可能會(huì)對結(jié)果產(chǎn)生干擾，成為了IVD檢測的一大痛點(diǎn)。
 
禾優(yōu)^® OsrHSA，專為IVD檢測而生，是一種來源于水稻胚乳細(xì)胞的重組人血清白蛋白OsrHSA，由于植物源的生產(chǎn)方式，同時(shí)經(jīng)過嚴(yán)格的提取和純化后，不含有上述干擾物質(zhì)，經(jīng)內(nèi)部自測和客戶反饋，禾優(yōu)^®OsrHSA可以勝任BSA在IVD行業(yè)的相關(guān)應(yīng)用，如保護(hù)劑，封閉劑，緩沖液，血漿基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品配制等。

禾優(yōu)^®OsrHSA，是武漢禾元生物科技股份有限公司自主研發(fā)、生產(chǎn)的一款植物源重組人血清白蛋白，相比BSA，它是利用生物工程技術(shù)重組表達(dá)，不源自動(dòng)物血清提取，具有純度高，批間差高度一致性等特點(diǎn)，在中國對HSA需求量日益增大的今天，禾優(yōu)^®OsrHSA無疑是IVD行業(yè)的澎湃動(dòng)力！   
另外，與傳統(tǒng)的人血清白蛋白提取不同，禾優(yōu)^®OsrHSA由基因工程水稻胚乳細(xì)胞表達(dá)后收集純化而來，整個(gè)過程從根源上解決了血液源成分的殘留，提高了產(chǎn)品整體純度，同時(shí)，規(guī)模化的種植—采收—純化生產(chǎn)工藝流程（圖1）使得禾優(yōu)^®OsrHSA具有高度一致的批間重復(fù)性，克服了不同批次需多次測試的弊端，同時(shí)也規(guī)避了微生物重組蛋白發(fā)酵液批間不穩(wěn)定，雜質(zhì)多的問題。更好的匹配規(guī)模化生產(chǎn)使用。

1. 使用場景：作為蛋白定量的標(biāo)準(zhǔn)品

HSA同BSA一樣，可廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的定量檢測，特別是臨床血液、體液，臨床化學(xué)等領(lǐng)域有較多應(yīng)用。禾優(yōu)^®   OsrHSA參考商業(yè)化的BSA標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋方法稀釋后，采用商業(yè)化的Bradford（Thermo Fisher）和BCA（Thermo Fisher）檢測試劑盒進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制，結(jié)果如圖2和圖3所示，禾優(yōu)^®OsrHSA同BSA一樣，擬合出的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性R²均大于0.99，經(jīng)準(zhǔn)確標(biāo)定后可在體外診斷領(lǐng)域中作為蛋白質(zhì)定量的標(biāo)準(zhǔn)品。

2. 使用場景：作為酶、酶標(biāo)抗體、抗原、細(xì)胞因子等的穩(wěn)定劑

體外診斷檢測試劑，如酶、酶標(biāo)記的抗體、標(biāo)準(zhǔn)抗原等生物活性物質(zhì)，在存儲(chǔ)過程中會(huì)受到溫度、pH、離子濃度、光照、酶、濕度等因素的影響，嚴(yán)重影響到試劑的穩(wěn)定性。白蛋白作為血漿中含量最豐富的蛋白，心形的蛋白結(jié)構(gòu)中，有17對二硫鍵，1個(gè)游離半胱氨酸，能夠結(jié)合多種物質(zhì)，是血漿中非常重要的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)載體，同時(shí)具有親水疏水作用力，作為保護(hù)劑，加強(qiáng)與蛋白質(zhì)的疏水作用，抵抗熱變性，穩(wěn)定蛋白結(jié)構(gòu)。

測試?yán)?：OsrHSA與牛血清白蛋白對酶標(biāo)抗體的保護(hù)對比
測試結(jié)果：

結(jié)論：禾優(yōu)^®OsrHSA作為穩(wěn)定劑，在37℃下對酶標(biāo)抗體的保護(hù)效果明顯優(yōu)于牛血清（圖4），且在37℃測試條件下酶促反應(yīng)的信號值相對于4℃相對變化率在10%以內(nèi)，穩(wěn)定性較好（圖5）。

測試?yán)?：禾優(yōu)^®OsrHSA與BSA對肌酸激酶的保護(hù)效果
測試結(jié)果：

結(jié)論：放置不同時(shí)間后，加入禾優(yōu)^®OsrHSA作為穩(wěn)定劑，不同溫度下肌酸激酶的T/C（Test值/Control值的比值）信號比值均高于BSA，表明其穩(wěn)定性較好（圖6），且保護(hù)效果不隨肌酸激酶的濃度發(fā)生變化。

測試?yán)?：禾優(yōu)^®OsrHSA與BSA對不同PCT（降鈣素原）磁珠的保護(hù)效果對比
 

結(jié)論：加入1% 禾優(yōu)^®OsrHSA作為穩(wěn)定劑，37℃放置相對于4℃放置的信號衰減值明顯優(yōu)于BSA（圖7）。

測試?yán)?：禾優(yōu)^®OsrHSA與BSA對OsrhbFGF（重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子）的保護(hù)效果對比實(shí)驗(yàn)
測試結(jié)果：

結(jié)論：25℃放置不同天數(shù)，禾優(yōu)^®OsrHSA對OsrhbFGF活性保護(hù)效果均好于BSA（圖8）。
 

3. 使用場景：作為酶、抗原、細(xì)胞因子等的稀釋劑和免疫檢測實(shí)驗(yàn)中的封閉劑

在臨床血液、體液，臨床化學(xué)等領(lǐng)域中，常用免疫診斷技術(shù)對目標(biāo)分子進(jìn)行定性或定量檢測。其中免疫層析，ELISA，化學(xué)發(fā)光，流式等檢測技術(shù)，抗原或抗體等從高濃度稀釋至低濃度過程中，需要用惰性蛋白模擬生理環(huán)境保證其活性不受損失，分子構(gòu)象能夠維持長時(shí)間的穩(wěn)定。抗原或抗體吸附在載體上后，需要用到惰性蛋白封閉未結(jié)合位點(diǎn)，減少非特異性吸附，減少交叉反應(yīng)，提高檢測方法的靈敏度。
測試?yán)?：禾優(yōu)^®OsrHSA與BSA對人纖維連接蛋白ELISA檢測的封閉和稀釋效果對比
測試結(jié)果

結(jié)論：禾優(yōu)^®OsrHSA可獲得與BSA相似的封閉效果，且0.5% OsrHSA即可獲得與1% BSA的封閉和稀釋效果（圖9）。
測試?yán)?:禾優(yōu)^®OsrHSA對不同處理的磁珠封閉實(shí)驗(yàn)
測試結(jié)果：

表1 重組人白蛋白對不同磁珠的封閉效果

結(jié)論：禾優(yōu)^®OsrHSA對不同處理的磁珠進(jìn)行封閉后，重復(fù)測定結(jié)果顯示其RSD（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差）值均小于10%，封閉效果較好（表1）。
測試?yán)?：禾優(yōu)^®OsrHSA與BSA對吖啶反應(yīng)試劑的稀釋穩(wěn)定對比
測試結(jié)果：

結(jié)論：加入禾優(yōu)^®OsrHSA的吖啶稀釋液穩(wěn)定性較好（表2）。

結(jié)論：經(jīng)檢測，禾優(yōu)^®OsrHSA不含有類固醇等物質(zhì)（表3），禾優(yōu)^®OsrHSA作為血清基質(zhì)對照干擾小，可保證準(zhǔn)確性和特異性。

結(jié)語
禾優(yōu)^®OsrHSA作為禾元生物的拳頭產(chǎn)品，劍指IVD原輔料市場，經(jīng)過全方位多次測試，證明重組植物源人血清白蛋白禾優(yōu)^®OsrHSA因其純度高，無人源動(dòng)物源物質(zhì)，單批次產(chǎn)量大，批間差小的特點(diǎn)，其作為封閉劑、保護(hù)劑、穩(wěn)定劑和各類試劑盒的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品、血清基質(zhì)時(shí)完全擁有常見BSA或牛血清相同或更優(yōu)的功能，產(chǎn)品也獲得了多家客戶的積極評價(jià)和續(xù)訂，擁有廣闊的市場應(yīng)用前景。