ELISA 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后標(biāo)曲的繪制和樣本濃度核算方法

實(shí)驗(yàn)雖然結(jié)束，但最重要的工作還是如何把 OD 值轉(zhuǎn)化為濃度，以達(dá)到分析數(shù)據(jù)的目的。

通常，推薦使用專門的曲線擬合工具繪制 ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線 curve Exert1.4

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1．啟動(dòng)「Curve Expert1.4」。

2．X 軸輸入所對(duì)應(yīng)的濃度值，Y 軸輸入標(biāo)準(zhǔn)品的 OD 值。如圖↓

3．單擊 [運(yùn)行]  按鈕，出現(xiàn)如下對(duì)話框。


4．單擊 [ok] 按鈕，出現(xiàn)如下兩個(gè)對(duì)話框，關(guān)閉下面一個(gè)對(duì)話框。



5. 在對(duì)話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱，從「1」開始依次點(diǎn)擊曲線名稱，在右下角會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)擬合的曲線。


6. 根據(jù)擬合的曲線選取 ELISA 擬合度最佳的曲線雙擊，出現(xiàn)如下對(duì)話框。

注意：選擇系數(shù)（即「r」值）最佳的曲線方程來進(jìn)行運(yùn)算。在上面的對(duì)話框右上角有「r」值 ，當(dāng)「r」值越接近 1，擬合度越好。

7．按 [Ctrl] 鍵+[L] 鍵或者右鍵單擊選擇 [analyze]，出現(xiàn)如下對(duì)話框。


8． Y 軸輸入對(duì)應(yīng)的樣本 OD 值，單擊 [Calculate] 按忸，即可得到待測(cè)蛋白的實(shí)際含量。


9. 如果出現(xiàn) , 可以調(diào)節(jié)相應(yīng)的  值，即根據(jù)預(yù)測(cè)的 X 結(jié)果，選擇附近的數(shù)值即可。


10. 如想得到 ELISA 擬合曲線的方程，可在步驟 6 的對(duì)話框空白處右擊，選擇「Information」，得到如下對(duì)話框：點(diǎn)擊「Copy」。

11. 在你需要的位置粘貼即可得到如下數(shù)據(jù)：

MMF Model：y =(a*b+c*x^d)/(b+x^d)

Coefficient Data:

a = 5.02803575349E- 002

b = 3.54849086120E+ 002

c = 2.67845070065E+ 000

d = 1.19812203348E+ 000