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          CCK-8試劑盒在細胞增殖檢測的中的應用

          瀏覽次數:2634 發布日期:2021-6-24  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

          什么是細胞增殖檢測


          細胞增殖是細胞在周期調控的因子下,通過DNA復制等反應,完成細胞分裂的過程。在細胞增殖中,新細胞的產生過程影響著體內所有組織的發育、生長和維持,同時,它也被嚴格調控著,以防失控的細胞分裂(可出現在各種癌癥)導致腫瘤的形成和器官功能的破壞。正因為細胞增殖對生物活動的這種廣泛影響,其在各種環境中的準確評估變得十分重要。



                                                                     腫瘤細胞增殖和轉化過程


          細胞增殖是通過細胞分裂引起的細胞數量增加,在整個生命周期中對正常組織發育和維持是必須的。一些類型的細胞會處于持續增殖狀態,如皮膚和骨髓細胞,但許多成人組織中的細胞會處于非增殖狀態,只有在損傷或感染時,才能被激活來補充細胞。與之相反,細胞周期關鍵基因突變引起的細胞增殖失調是各類癌癥的標志,會造成腫瘤異常的不受控制的生長。


          增殖檢測一般用于分析分裂中的細胞數量的變化,進而反應細胞的生長狀態及活性,細胞增殖檢測是細胞分析和藥物研發中經常會使用的手段。目前廣泛應用于腫瘤生物學,分子生物學,藥代動力學等領域。


          細胞增殖檢測的方法


          一類是直接法,這種方法就是直接測定進行分裂的細胞數來評價細胞的增殖能力,另一類是間接的方法,我們通過檢測細胞的活力來評價細胞的增殖能力。


          常見的細胞增殖檢測方法包含:直接計數法;MTT檢測法;MTS檢測法;CCK-8檢測法;3H-TdR滲入法;Brdu/EdU檢測法;CFSE檢測法;刃天青還原法;活細胞蛋白酶底物法/ATP法等。



                                                                               常見檢測方法對比
          其中,MTT比色是一種目前被廣泛采用的檢測細胞生長和存活的方法。


          CCK-8試劑盒


          CCK-8試劑盒全稱Cell Counting Kit-8,是一種基于WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒

                                                                         CCK-8檢測細胞活性原理圖
          其工作原理為:在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物(formazan)。顏色的深淺與細胞的增殖成正比,與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值,間接反映活細胞數量。
          CCK-8被經常用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗等。
          優點:
          · 酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾;
          · 靈敏度高,可以測定較低細胞密度;
          · 細胞毒性非常低,因此加入WST-8顯色后,可以在不同時間反復用酶標儀讀數從而找到最佳測定時間;
          · 檢測時間短
          · 重復性優于MTT法;
          · 操作簡單,省時省力,省去了洗滌細胞,適合批量樣品檢測
          · 檢測試劑很穩定。




          中喬的CCK-8試劑盒也來啦~~

                                        
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