豬 O 型口蹄疫合成肽結構蛋白 ELISA 抗體檢測試劑盒說明書

通用名：豬 O 型口蹄疫合成肽結構蛋白 ELISA 抗體檢測試劑盒（

 

英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Foot and Mouth Disease Virus O （ELISA）

 

【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒

 

【預期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發生水泡和爛斑。

 

本試劑用于檢測豬血清中口蹄疫病毒 O 型抗體，可用于口蹄疫病毒 O 型疫苗免疫效果評價。

 

【原 理】

 

本試劑盒系由預包被口蹄疫病毒O型VP1抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬口蹄疫病毒O型抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有豬口蹄疫病毒O型抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有口蹄疫病毒O型抗體。

 

 

【儲存及有效期】 于 2～8℃避光保存，有效期為 12 個月。

 

包被板開封后請于 2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為 2 個月。

 

【適用儀器】 含 450nm、630nm 波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

 

 

1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品 1 周內可于 2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

 

2.用樣品稀釋液將待檢血清按 40 倍稀釋（如 5μl 血清加入 195μl 樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

 

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作 20 倍稀釋。

 

 

1.使用前將試劑盒置室溫 30 分鐘，恢復至室溫。

 

2.取所需用量酶標板條，設空白對照 1 孔、陰性/陽性對照各 2 孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

 

3.空白對照孔加樣品稀釋液 100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照 100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品 100μl。

 

4.混勻，置 37℃反應 30 分鐘。

 

5.扣去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復洗滌 5 次，拍干。

 

6.每孔加酶標記物 100μl（空白孔除外）。置 37℃反應 30 分鐘。

 

7.洗滌，同步驟 5。

 

8.每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl，混勻，37℃避光反應 10 分鐘。

 

9.每孔加終止液 50μl，混勻，于 450nm(可用 630nm 作參比波長）測定各孔吸光值（A 值），無參比波長用空白孔調零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

 

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.10，陽性對照≥0.6。

 

 

1.樣品 A 值≥0.38 為陽性；樣品 A 值在 0.2 到 0.38 之間為可疑；樣品 A 值＜0.2 為陰性。

 

2.本實驗結果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。

 

 

該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬口蹄疫病毒 O 型抗體，根據 A 值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

 

 

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

 

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

 

3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

 

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。

 

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

 

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

 

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

 

8.不同批號試劑組分不得混用。