RPA（恒溫?cái)U(kuò)增）技術(shù)應(yīng)用于腫瘤基因檢測(cè)

腫瘤基因相關(guān)基因檢測(cè)在癌癥早期診斷中意義重大。目前的檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)為PCR和基因測(cè)序技術(shù)，而這些技術(shù)大多需要精密的儀器和復(fù)雜的試驗(yàn)流程，專業(yè)的實(shí)驗(yàn)人員配置。在現(xiàn)有的分子診斷技術(shù)中，以RPA為代表的核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)以其快速，靈敏，無(wú)需儀器等特點(diǎn)，使突破以上壁壘成為可能。
 
近日，大連醫(yī)科大學(xué)劉元斌課題組發(fā)明一種無(wú)需任何儀器，實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)突變基因并肉眼識(shí)別的新方法，被稱為AS-RPA-PNA-SYBR (ARPS) system。該方法以RPA（重組酶聚合酶恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)）為基礎(chǔ)，加之PNA技術(shù)（肽核酸類似物），并利用SYBR Green I核酸染料法顯色，肉眼即可判斷核酸擴(kuò)增與否。
文章中，作者比較了在PCR，測(cè)序以及ARSP在非小細(xì)胞肺癌中EGFR突變檢測(cè)應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中，5分鐘便能檢測(cè)到EGFR 19Del(2)缺失突變，10分鐘檢測(cè)EGFRL SNP 突變，實(shí)現(xiàn)肉眼快速判斷（圖1），并在組織樣本中同樣得到驗(yàn)證（圖2）。
同樣，10到20分鐘之內(nèi)成功檢測(cè)到EGFR點(diǎn)突變。與傳統(tǒng)的DNA測(cè)序方法相比較，ARPS有著許多優(yōu)勢(shì)之處，包括時(shí)間短，成本低，操作簡(jiǎn)單，無(wú)需精密儀器等，而且，在基因組DNA樣本中，ARPS可以檢測(cè)到30%和40%的靶向突變位點(diǎn)，靈敏度與測(cè)序相當(dāng)（圖3）。之前有文章報(bào)道稱，RPA技術(shù)與末端熒光檢測(cè)和膠體金側(cè)流試紙條以及微流控芯片結(jié)合檢測(cè)EGFR突變，但還沒有類似ARSP肉眼觀測(cè)法的應(yīng)用。

然而，ARSP法同樣有待于進(jìn)一步優(yōu)化。比如，對(duì)于每一次EGFR檢測(cè)來說，檢測(cè)靈敏性和特異性都還有待提高；由于樣本量有限，現(xiàn)仍需更多的臨床樣本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。無(wú)論如何，在精準(zhǔn)醫(yī)療大背景下，對(duì)于一些沒有條件購(gòu)買測(cè)序儀，以及不具備專業(yè)操作能力的不發(fā)達(dá)地區(qū)和國(guó)家，這種快速簡(jiǎn)便，操作簡(jiǎn)單的，無(wú)需任何儀器的ARSP基因檢測(cè)法無(wú)疑為癌癥基因檢測(cè)提供有效參考，同時(shí)也為分子即時(shí)診斷領(lǐng)域（POCT）提供新的潛在解決方案。

國(guó)產(chǎn)化RPA試劑盒正在異軍突起，南京沃博生物科技有限公司作為安普未來生物科技有限公司江蘇省獨(dú)家代理。安普未來開發(fā)的核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)稱為重組酶聚合酶擴(kuò)增 (MIPA) 技術(shù)全系列可替代英國(guó)TwistDx Inc公司的RPA試劑盒，常備現(xiàn)貨歡迎垂詢訂購(gòu)TwistAmp Basic ，TwistAmp exo ，TwistA m p nfo，TwistAmp exo RT，TwistAmp Basic RT，Milenia Hybridtech 1 側(cè)向流試劑條。
運(yùn)用安普未來開發(fā)的核酸恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型）并利用SYBR Green I核酸染料法顯色，肉眼就可以看出有無(wú)擴(kuò)增。