樂楓純水為您解讀實時熒光定量PCR實驗用水

文章要點：上海樂楓市場部對目前疫情防控工作中的熒光定量PCR的核酸檢測技術做了深入淺出地闡述，并為該實驗中使用的純水設備做了解析和介紹。

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目前疫情的防控工作取得了階段性的成效，基于實時熒光定量PCR的核酸檢測技術在新冠病毒快速鑒定及確診中發揮了重要作用。
 

什么是實時熒光定量PCR？
 

實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技術，簡稱qPCR,是在PCR反應體系中加入熒光物質（熒光染料或熒光標記的特異性探針），利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
 

與普通PCR相比，實時熒光定量PCR技術是一次由定性技術向定量技術的飛躍。運用該項技術，可以對DNA、RNA樣品進行相對定量、絕對定量和定性分析。

實驗流程：

在實時熒光定量PCR實驗中，可以分為樣本采集，RNA提取，RNA質量鑒定，反轉錄及數據分析幾個步驟，在進行引物、模板的稀釋，試劑的配制和補足反應體系時都會用到水，水質量的好壞直接影響最終數據分析的結果。
 

水中的顆粒物，離子含量，有機物及細菌微生物等雜質對實驗都會帶來影響，最值得關注的因素有以下兩個方面：
 

DNA酶和RNA酶能夠特異性地降解DNA和RNA。在進行實時熒光定量PCR時，去除這兩種酶從而保證提取的RNA和DNA樣本的完整性十分關鍵。尤其在提取RNA的時候，RNA極易被降解。這是因為RNase非常穩定，且無處不在，用常規的高溫高壓蒸汽方法和蛋白酶抑制劑不能使所有的RNase完全失活。如果樣本中的核酸被降解，會影響檢測結果的準確性，甚至造成假陰性檢測結果。

因此，實時熒光定量PCR實驗用超純水必須有效降低DNA酶和RNA酶的含量，減少對實驗的影響。
 

實時熒光定量PCR實驗需要根據不同的引物對和模板確定最佳的鎂離子濃度。

Mg2+濃度過低，會影響DNA聚合酶的活性，導致產量降低，影響實時定量的敏感性；

Mg2+濃度過高，會增加引物二聚體的形成，這會影響特異性。

因此，實時熒光定量PCR實驗用超純水必須控制Mg2+濃度，避免背景因素帶來的不確定性。

 

綜上，實時熒光定量PCR實驗推薦使用超純水，水質要求如下圖所示：
 

 

純水儀器選型推薦：
 

根據上述的分析和用水指標，可以采用樂楓的Genie G一體超純水機和Genie PURIST超純水機，這兩種純水設備都可以滿足實時熒光定量PCR反應的用水要求。
 

南科大安裝的 Genie G
 

GenieG和Genie PURIST純水設備是上海樂楓RephiLe為e 時代的實驗室純水需求開發的智能型實驗室純水系統。
采用了無線技術，主機、主控屏和手柄之間采用無線連接，按需隨意放置。
耗材/ 零部件實現了可全程追溯，全方位監控的要求，防水的控制屏可帶手套操作。
Genie純水儀設計緊湊，體積小，可掛墻，可置于臺盆下，方便用戶合理利用空間。

其中，GenieG采用了EDI模塊，可從自來水制備超純水和EDI純水，為實驗不同需要帶來方便。Genie PURIST則是從純水制備超純水的一款儀器，安裝使用非常方便。

 

 Genie系列超純水機，可以配置樂楓RephiLe獨創配方填料的低鎂型純化柱，不但可以廣譜去除水中的金屬離子，還可以特異性去除水中的鎂離子，保證超純水中Mg2+對qPCR實驗零干擾。這種低鎂型純化柱是樂楓獨家提供，專為PCR和測序實驗研究開發的產品。

 裝有帶電荷尼龍膜的RephiBio終端濾器。 RephiBio可以除DNA酶和RNA酶，避免核酸酶對實驗的影響。

中科大安裝的 Genie PURIST
 

Genie系列純水機水質穩定，品質高，而且有數據保證：水質已經通過第三方省級以上檢測機構的檢測；RephiBio終端過濾器，也具有國外實驗室熱源、DNase和RNase的檢測報告。使用Genie系列超純水機，可以確保超純水對qPCR反應的不確定性降至最低，讓用戶“用水無憂”，享受高端的體驗。

 

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上海樂楓生物科技有限公司

上海樂楓(Rephile Bioscience，Ltd.) 是一家專業從事高端水純化和實驗室分離純化產品研發、設計和制造的企業，為高科技生物技術和生命科學領域的用戶服務。樂楓公司著眼于全球發展，在中國、美國、法國、印度、南非等近20個國家建立了銷售機構，同時也為國際大型公司提供OEM和ODM，產品銷往包括歐美的近100個國家。成立十余年，樂楓持續投入研發，創立出了自己的產品品牌RephiLe（瑞楓），推出了多個新概念產品- 無線連接的Genie系列純水系統和智能型大流量純水工作站Super-Genie等。目前樂楓純化柱填料配方齊全，也提供多款密理博純水系統的兼容耗材。

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