HSP10,魚熱休克蛋白10ELISA試劑盒的檢測范圍及操作方法

HSP10,魚熱休克蛋白10ELISA試劑盒的檢測范圍及操作方法

•  檢測范圍：3.125 ng/ml – 100 ng/ml。
•  靈敏度：最低檢測濃度小于0.1 ng/ml。
•  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
•  重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.   設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.   樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.   除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被魚10kDa熱休克蛋白1（HSP10）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的魚10kDa熱休克蛋白1（HSP10）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
說明
由于現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產品可能存在一定的質量技術風險。

• 最終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環境密切相關，請務必準備充足的標本備份。
• 不同批次的同一產品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據試劑盒內說明書進行實驗操作，網站電子版說明書僅作參考。
• 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結果。
• 本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。
• 使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引入導致ELISA實驗結果偏差。
• 若樣本為細胞培養上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態、細胞數量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。
• 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。

ELISA試劑盒常見問題：
1.一個96T試劑盒能做多少個樣本?
 
每次實驗需要做6個標準孔和1個空白對照,所以最終可以檢測89個樣本,如果樣本做復孔,則等于樣本翻倍.
 
2.一次實驗需要多少時間?
 
ELISA試劑盒大部分采用雙抗夾心法檢測,預計時間是2-2.5小時,競爭法時間則為1.5-2小時.
 
3.產品穩定性如何?
 
經測定，試劑盒在有效期內按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。為減小外部因素對
試劑盒破壞前后檢測值的影響，實驗室的環境條件需盡量保持一致，尤其是實驗室內溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。
 
4.樣本需要分批次檢測,試劑盒是否可以只做一次標準曲線?
 
雖然試劑盒操作原理都一樣,但是每次實驗的參數都會受到影響,比如時間,溫度等,所以為了得到更為準確的數據,建議每次實驗時重新制作標準曲線.
 
5.樣本較多是否可以減少標準孔?
 
為了確保曲線的穩定,不建議減少標準孔,請盡量確保6個標準孔和1個空白對照.
 
6.試劑盒一次性用不完,下次還可以用嗎?
 
ELISA試劑盒的酶標條可以拆卸,用不完的試劑按照說明書要求的保存條件儲存起來,在有效期內,可以下次在使用.
 
7.組織樣本經過福爾馬林浸泡后,還能做ELISA實驗嗎?
 
不可以,這類樣本只能制作病理切片,可以做免疫組化或者WB等試驗。
 
8.檢測一個指標,需要準備多少血清?
 
我公司的ELISA試劑盒,要求檢測樣本是離心后50ul直接檢測,所以客戶需要準備離心后的血清在50-100ul之間,原則上就是確保50ul的上樣量,如果是多個指標,樣本以此類推.
 
9.對于組織樣本需要提供多少呢?
 
組織樣本按照鮮重100mg以上即可,不可風干或者滅菌等處理.
 
10.ELISA試劑盒檢測需要什么儀器?
 
全自動酶標儀,采用450nm波長,檢測OD值.
 
11.血漿樣本的時候可以選擇哪些抗凝劑？
 
通常選用的抗凝劑有EDTA、肝素、檸檬酸鈉.
 
12.保存一段時間的血清樣本發現變紅什么原因?
 
血清變紅色,通常是”溶血”現象導致的,其原因首先考慮血清是否收到污染,其次溶血是因為紅細胞破碎,所以考慮在離心的時候不徹底,導致在保存過程中變紅的現象.此時的樣本若是淺紅色,建議再次離心到透明狀態,如果是深紅色,不建議用于ELISA實驗.
 
13.之前用剩余的盒子是否可以跟新批次的試劑盒混用?
 
不建議混用,不同批次的試劑盒之間存在一定的皮內差,混用會導致差異化增大,所以先把剩余的盒子用完,再做新批次.
 
14.不同試劑盒里面的洗滌液可以混用嗎?
 
洗滌液成分是一種弱酸,不同盒子里面的洗滌液都是一樣的,可以混用.
 
15.標準曲線做出來有一個點偏離曲線是什么原因?
 
曲線上面的某個點不在曲線上,這種現象叫做跳孔,通常是由系統誤差造成的,建議在試劑盒使用前充分平衡試劑盒,然后標準品要充分搖勻后,再做一次曲線.
 
 
16.你們公司試劑盒如何保證質量?
 
① 高效、靈敏、特異性強的抗體。
 
② 吸附性能好、空白值低、孔底透明度高的固相載體。
 
③ 批內差與批間差分別小于9%和11%，假陽性率控制在3%；線性R值在0.99以上。