侵襲美國及歐洲的西尼羅河病毒檢測方法

1. 西尼羅河病毒簡介

西尼羅病毒 (West Nile Virus， WNV)于 1937年在非洲的烏干達首次被發現 ， 從West  Nile地區的一位發熱的成年婦女血液中分離到， 因此得名 West Nile Virus。西尼羅病毒屬于黃病毒科黃病毒屬。黃病毒科成員還有登革熱病病毒、日本腦炎病毒以及黃熱病病毒等70 余種 ， 多屬于蟲媒病毒。西尼羅病毒廣泛分布于非洲、中東和西亞 ， 主要引起西尼羅河熱 (W est Nile Fever) ， 所致疾病大多為人畜共患病，引起嚴重的公共衛生問題且多缺乏有效的治療 、預防和控制措施 ，給疾病控制提出了嚴峻的挑戰。

2. 西尼羅河病毒病原學

西尼羅河病毒為RNA病毒，屬于黃病毒科，黃病毒鼠，病毒呈球形，有囊膜。其病毒離子大約為40nm，病毒的核酸為不分節段的單股正鏈RNA，約10000-11000個堿基。編碼3種結構蛋白:病毒殼蛋白(C)、前膜蛋白(preM)、包膜蛋白(E)和七種非結構蛋白 :NS1 、 NS2a 、NS2b 、 NS3 、 NS4a 、 NS4b 和NS5。E蛋白為西尼羅病毒最重要的抗原結構蛋白，介導病毒與宿主結合， 能刺激機體產生相應抗體，是決定病毒毒力的決定性蛋白，為病毒紅血球凝集素并介導病毒 -宿主的結合。

3. 流行病學及傳播

西尼羅病毒主要通過鳥—蚊—鳥 、人和動物途徑傳播。該病毒可感染人、鳥類、多種哺乳動物、兩棲類及爬行類動物，人和鳥類最為易感，其所致疾病主要分布在沿鳥類遷移飛行路線所連接的歐洲 、非洲以及中東國家。 它的主要傳染源為處于病毒血癥期的帶毒動物 ，和該病毒的自然儲存宿主-野鳥 ，傳播該病毒的蚊子主要包括庫蚊、伊蚊和曼蚊，特別是尖音庫蚊將病毒傳播給人 。蚊子因叮咬感染 WNV 的鳥類而帶毒，然后帶毒的蚊子通過叮咬將西尼羅病毒傳播給人和其他物 。西尼羅病毒能穿過血腦屏障，干擾正常的中樞神經系統功能， 臨床上主要表現為腦炎或腦膜腦炎。西尼羅病毒病主要發生在晚夏或早秋，氣候常年溫暖地區四季均可發生WNV。

器官移植和輸血也可能是傳播的途徑，2002年，美國喬治亞洲公共衛生部和美國CDC報告了2例不明原因的發熱和腦炎，經調查該2名患者均移植了同一個感染西尼羅河病毒的人的器官。此外，哺乳傳播和傷口入侵傳播也是可能的傳播途徑，應注意防護。

人 、動物和鳥類等都是易感動物 。如病毒可感染鳥(主要是烏鴉 )、蚊 (庫蚊 、伊蚊和曼蚊 )、人 、夜猴 、馬 、狗、貓 、豬 、駱駝 、雞 、鴨、鵝 、鴿子 、牛、蝙蝠、藍鳥、松鼠、和家兔等。

中國到目前為止還沒有發現西尼羅河病毒感染病例，但中國有很多地方夏天潮濕、炎熱，一些地方洪水泛濫，具備蚊蟲大量滋生的條件； 另外，隨著中國與世界其他國家之間的貿易、旅游、人員往來日益頻繁，具有傳播西尼羅河病毒潛在風險。因此在我國建立防治技術儲備是非常必要的。

4. 西尼羅河病毒感染的臨床特征

4.1 脊髓灰質炎樣綜合征

表現為高熱 39 ℃以上 ， 前期表現為頭痛 、倦怠 、亦有寒戰、盜汗、肌痛以及意識混亂等；嚴重的肌無力也是常見癥狀， 雙側或單側上肢肌無力呈漸進性發展，下肢無力甚至癱瘓；膀胱功能失調，急性呼吸窘迫。

4.2 西尼羅病毒性腦炎

大約有 1 /300 ～ 1 /150西尼羅病毒感染者可發展為無菌性腦膜炎 、腦炎或腦膜腦炎， 潛伏期大約為 2 ～ 14 d，臨床上表現為發熱 ，頭痛 ，抽搐，意識障礙和腦膜刺激癥等腦炎或腦膜腦炎癥狀 。

4.3 西尼羅熱

80 %的人感染 WNV 沒有臨床癥狀， 可自行康復.西尼羅病毒感染者典型的癥狀表現為西尼羅熱，大約占感染者的 1 /3。潛伏期一般在1 ～6 d，臨床上表現為發熱 、頭痛 、倦怠、乏力、嗜睡 、疲勞感加重， 有或無前驅癥狀突然發病， 1 /3 以上的病人發熱可達到 38.3 ～ 40 ℃。部分病人還可出現嚴重的眼痛 、結膜水腫 、充血和肌肉酸痛等癥狀。

4.4 馬屬動物感染

馬屬動物感染 WNV 后很少出現臨床癥狀 ，但有 10 %的病例發展為嚴重的神經性疾病，患馬精神抑郁 ， 食欲廢絕， 共濟失調 ， 肌肉震顫， 后肢麻痹 ，視物不清，轉圈 ，無法吞咽 ，興奮 ，癱瘓甚至死亡。

5. 檢測方法

5.1 血清學檢測

血清學檢測是最常用的實驗室臨床檢驗方法。方法為酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，該技術用于西尼羅河病毒IgG和IgM抗體的檢測， 在許多情況下代替了血凝抑制試驗、補體結合試驗和中和試驗。其中最有效的為捕獲法IgM 的ELISA 檢測方法， 感染 WNV 后 IgM的免疫應答出現的比 IgG 早 ， 捕獲法ELISA不但可用來檢測血清中或大腦脊髓液中的WNV的IgM，而且 具有快速 、高敏性且能定量等優點， 所以此技術可用于感染 WNV 的早期診斷，靈敏度高于PCR檢測 。該方法是現有檢測血清和腦脊液中病毒抗體最敏感的篩檢方法

5.2 病原學檢測

通常用于病毒分離的標本有患者的腦脊液、處于病毒血癥的血清(持續 5d 左右)、腦組織 ，馬的腦和脊髓組織 ，鳥的腎、腦和心臟組織。一般使用己知的對西尼羅河病毒敏感的哺乳動物細胞系如 Vero細胞或蚊子細胞系來分離病毒。病毒分離法是檢測病毒的經典技術， 是診斷病毒感染的“金標準” ，對于新發疾病病毒分離和病毒的自然宿主是非常有價值的工具 ，但此法要求條件高，分離率低， 操作復雜 ，所需時間長 ，不能夠快速、大量的進行病毒診斷 。

此外，核酸檢測方法也用于西尼羅河病毒的檢測。如 RT - PCR， Taq Man RT-PCR 分析和核酸擴增(NASBA)等都可用來鑒定病毒分離物是否為西尼羅河病毒。

6. 相關檢測產品信息

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7. 參考文獻

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