奶粉中香蘭素和乙基香蘭素的測定
關鍵詞：奶粉；香蘭素；乙基香蘭素； GC-FID
Key words：milk powder; Vanillin; Ethyl vanillin; GC-FID
摘要
以二氯甲烷為溶劑，提取奶粉中的香蘭素和乙基香蘭素，經分散固相萃取方法凈化后，用Trace1310氣相色譜儀測定，外標法定量，線性良好，回收率和重現性均滿足分析要求。
引言
香蘭素（vanillin），又叫香草醛，學名3-甲氧基-4-羥基苯甲醛；乙基香蘭素（ethyl vanillin），學名3-乙氧基-4-羥基苯甲醛。兩者均為白色或微黃色結晶粉末，微溶于水，具有香莢蘭香氣及濃郁的奶香，是重要的食品添加劑，廣泛用作食品、飲料以及日化用品等的增香劑。但是，大劑量使用香蘭素等香料將有害健康。根據《食品安全國家標準食品添加劑使用規定》GB2760-2011要求，凡使用范圍涵蓋0至6個月嬰幼兒配方食品不得添加任何食用香料。 2012年7月有報道稱，幾大洋品牌的I段奶粉被檢出添加了國家禁止的香蘭素，因此需要建立相關檢測方法對奶粉中的香蘭素進行檢測。
目前關于香蘭素和乙基香蘭素的測定方法主要有分光光度法、電化學法、高效液相色譜法、氣相色譜和氣質聯用法，由于HPLC法對樣品凈化程度要求不高，因此樣品預處理方面的研究較少。本方法采用二氯甲烷提取，分散固相萃取凈化，建立同時測定嬰幼兒配方奶粉中香蘭素和乙基香蘭素含量的氣相色譜法。
實驗部分
主要儀器設備與試劑
儀器：氣相色譜儀， Trace 1310，美國ThermoFisher。
試劑：二氯甲烷，色譜純；氯化鈉，分析純；Cleanert C18固體吸附劑；香蘭素和乙基香蘭素標準品。
樣品前處理方法
稱取5 g奶粉（精確到0.01 g）于100 mL容量瓶中，加入20 mL水，振蕩，使成為均勻奶液，加水定容至刻度，搖勻。用移液管移取5 mL奶液于15 mL離心管中，加入2 g NaCl， 5 mL二氯甲烷，蓋好蓋子振蕩提取5 min，靜置2 min，然后以10000 rpm離心5 min，小心全部移取下層有機層，過無水硫酸鈉后，定容至5 mL，加入150 mgC18吸附劑，渦旋1 min，靜置后吸取上層清液過0.2 μm濾膜，待氣相色譜儀測定。
樣品的測定
上述得到的樣品溶液直接進樣，氣相色譜儀檢測，外標法定量。儀器參數設置見表1.
結果與討論
標準樣品的色譜圖和線性
標準樣品中香蘭素和乙基香蘭素的色譜圖如圖1所示。用標準樣品配制成濃度分別為1 μg/mL, 2.5 μg/mL,10 μg/mL, 35 μg/mL, 50 μg/mL的系列標準工作液，進樣1 μL，然后按照以上所述的測定方法進行GC-FID測定，以標準物質的濃度為橫坐標，以各標準物質的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得到香蘭素和乙基香蘭素的標準工作曲線如圖2。香蘭素和乙基香蘭素的相關系數分別為0.9980和0.9991。
方法的精密度和回收率
對香蘭素和乙基香蘭素的1 μg/mL， 2 μg/mL， 10 μg/mL三個水平加標樣品分別進行了3次測定，平均回收率和相對標準偏差列于表2中。樣品加標的色譜圖見圖3。選擇1 μg/mL的標準溶液，以噪聲的3倍計算，本方法中香蘭素和乙基香蘭素的檢測限分別為0.33 μg/mL和0.25 μg/mL。
對市售4個奶粉樣品中香蘭素和乙基香蘭素的測定
按上述前處理方法測定了4個奶粉樣品中的香蘭素和乙基香蘭素含量，其中樣品1為I段奶粉，為禁止添加香蘭素和乙基香蘭素。樣品2、 3、 4為III段奶粉，可以添加香蘭素和乙基香蘭素，允許添加量為5 mg/100 mL，即50 μg/mL。其中100 mL以即食食品計，即沖調好的奶液，按照奶粉沖調說明一般為每100 mL水加入14 g奶粉。樣品中的香蘭素和乙基香蘭素的含量采用外標法定量，配制一系列標準工作溶液，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，定量結果按公式（1）換算為奶液中的含量，列于表3中。
結論
建立了嬰幼兒配方奶粉中香蘭素和乙基香蘭素的氣相色譜測定方法。本方法步驟簡單、快捷，精密度高，具有較好的分離度，雜質干擾少，測定結果準確可靠，靈敏度高，是測定嬰幼兒配方奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的較好的方法。
