大鼠（Rat）血管內(nèi)皮生長因子B（VEGF-B）ELISA檢測試劑盒使用說明書
本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
大鼠（Rat）血管內(nèi)皮生長因子B（VEGF-B）ELISA檢測試劑盒使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被血管內(nèi)皮生長因子B（VEGF-B）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮生長因子B（VEGF-B）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
- 酶標(biāo)儀（450nm）
- 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
- 37℃恒溫箱
操作注意事項
1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.濃度為0的S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。
4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
|
名稱 |
96孔配置 |
48孔配置 |
備注 |
|
微孔酶標(biāo)板 |
12孔×8條 |
12孔×4條 |
無 |
|
標(biāo)準(zhǔn)品 |
0.3mL*6管 |
0.3mL*6管 |
無 |
|
樣本稀釋液 |
6mL |
3mL |
無 |
|
檢測抗體-HRP |
10mL |
5mL |
無 |
|
20×洗滌緩沖液 |
25mL |
15mL |
按說明書進行稀釋 |
|
底物A |
6mL |
3mL |
無 |
|
底物B |
6mL |
3mL |
無 |
|
終止液 |
6mL |
3mL |
無 |
|
封板膜 |
2張 |
2張 |
無 |
|
說明書 |
1份 |
1份 |
無 |
|
自封袋 |
1個 |
1個 |
無 |
注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、25、50、100、200、400 pg/mL
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
- 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
- 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
- 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
- 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
- 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
- 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
- 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
- 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
- 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
- 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
- 靈敏度：最低檢測濃度小于1.0 pg/mL。
- 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
- 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
- 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
- 有效期：6個月
免責(zé)聲明
- 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負責(zé)。
- 嚴(yán)格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān)。
上海羽朵生物科技有限公司生產(chǎn)銷售elisa試劑盒、動物血清、血漿、全血、抗原抗體、金標(biāo)試劑盒檢測卡、抗血清、生物試劑、培養(yǎng)基、實驗室儀器耗材、化學(xué)試劑、生物制品、標(biāo)準(zhǔn)品、對照品、生化免疫制品、免疫親和柱、菌株、質(zhì)粒、室內(nèi)質(zhì)控品、細胞、冰袋、代理進口產(chǎn)品等
量大從優(yōu)！歡迎經(jīng)銷商代理商洽談合作事宜！
聯(lián)系電話：15346180516 聯(lián)系QQ：3128828699
