如何使用Molecular Devices SpectraMax Paradigm多功能讀扳機進行HTRF人腫瘤壞死因子實驗？

本應用記錄了我們如何使用Spectramax Paradigm 多功能讀扳機執行穩定，免洗細胞因子實驗，并具有良好的Z因子。

HTRF是由Cisbio試劑公司研發的多功能技術，用于檢測生物分子間相互作用。它結合了熒光共振能量轉移（FRET）技術和時間分辨熒光（TRF）技術，實現消除半衰期短的背景熒光。這個實驗應用供體和受體熒光染料。當供體和受體之間足夠近的情況下，由光源（如，高能閃爍氙燈）照射產生的供體激發光就會通過能量轉移機制到受體，反過來作為受體的特定激發波長。HTRF采用四個特定的熒光染料，可以組合成兼容的供體-受體TR-FRET對。供體為銪元素（Eu3+）和鋱元素（lumi4™- Tb），其長壽命熒光使它們可以應用在時間分辨熒光實驗中。兩種受體已經被研發用于HTRF實驗，分別是, XL665 and d2。都具有激發光譜重疊的HTRF供體的發射光譜。每個都在665nm有一個發射峰，但這個區域的波長并不能激發供體，或者激發非常弱。最早期的的HTRF受體，XL665，來源于紅藻的藻膽蛋白色素的純化。第二代受體，d2，是一種改進的別藻藍蛋白，比XL665小100倍，用來緩解可能發生在XL665檢測時的空間位阻問題。