高效液相色譜法青檢測青蒿素

青蒿素是從中藥黃花蒿中分離的具有抗惡性瘧疾激勵的一種化合物，呈無色針狀結晶。黃花蒿（Artemisia annua Linn）為中國傳統中草藥。其有效成分—青蒿素具有良好的抗瘧效果。目前青蒿素用于瘧疾防治的價值已被人類認識和接受，世界衛生組織已把青蒿素的復方制劑列為國際上防治瘧疾的首選藥物。

中國知名科學家屠呦呦根據《肘后備急方》等中醫藥古典文獻描述，經過艱苦卓絕的努力并從獲取靈感，先驅性地發現了青蒿素。2015年10月5日，瑞典卡羅琳醫學院宣布，將諾貝爾生理學或醫學獎授予中國藥學家屠呦呦以及愛爾蘭科學家威廉•坎貝爾和日本科學家大村智，表彰他們在寄生蟲疾病治療研究方面取得的成就。日前，屠呦呦女士在瑞典首都斯德哥爾摩音樂廳舉行的2015年諾貝爾獎頒獎儀式上正式領取諾貝爾生理學或醫學獎。

青蒿素對瘧原蟲紅內期有直接殺滅作用。對實驗動物毒性很低，在機體內吸收快、分布廣、排泄快。青蒿素抗瘧機理是干擾了瘧原蟲的表膜——線粒體的功能。本品治療間日瘧、惡性瘧平均原蟲轉陰時間快于氯喹，臨床治療中未見毒副作用，特別在抗氯喹原蟲株地區治療惡性瘧和腦型瘧更顯示出其優越性。通過對青蒿素進行結構改造，找到的新的衍生物——甲基青蒿素和青蒿酯鈉——具有更好的效果，甲基青蒿素口服劑量只需青蒿素的 l/6～1/8，且無苦味；青蒿酯鈉易溶于水，可用于兇險型瘧疾的靜脈注射搶救。

中國藥典中對青蒿素檢測作出了明確規定。RephiLe根據藥典與相關文獻推出青蒿素含量檢測解決方案。該方案采用HPLC檢測。詳細解決方案如下：

一、實驗方法

高效液相色譜法（HPLC）。

二、儀器和試劑

高效液相色譜儀，超聲振蕩儀，PURIST 超純水系統。

甲醇。

三、試驗方法

1、色譜條件

采用迪馬公司 Diamonsil C18 色譜柱，甲醇-水（75 : 25）流動相；流速 1 mL/min；ELSD 溫度 40℃，載氣壓力 3.5 bar，放大系數 9；進樣體積 20 μL。

2、標準品溶液配制

精準配置濃度為 250 μg/mL 的青蒿素甲醇溶液，置于棕色容量

3、樣品溶液制備

稱取 1 g 樣品粉末置于三角瓶中，超聲處理 15 min，過濾，重復過濾 3 次并合并濾液減壓回收溶劑并移至 50 mL 容量瓶中，用甲醇清洗并轉移至 50 mL 容量瓶中，甲醇定量至刻度。用 0.45 μm 的 RephiQuik PTFE 過濾后得試液。

4、標準曲線

分別進標準系列溶液 4 μL、8 μL、10 μL、12 μL、16 μL、20 μL 進行 HPLC 分析，然后以峰面積為縱坐標，以青蒿素的含量為橫坐標，繪制標準曲線。

5、試樣測定

吸取 10 μL 試液進行 HPLC 分析，測定其峰面積，從標準曲線計算得試液中青蒿素的含量。

6、結果計算

樣品中青蒿素的含量按下式計算

      式中：

      X一試樣中青蒿素的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

      c一由標準曲線上查得進樣液中青蒿素的量，單位為微克每毫升（μg/mL）；

      V一試樣稀釋液總體積，單位為毫升（mL）；

      m一試樣質量，單位為克（g）；

      計算結果保留兩位有效數字。

在使用HPLC檢測時，要求必須使用符合中華人民共和國標準GB6682-2008的一級純水。其他各種標準溶液的配制應該使用二級純水。一臺合格的超純水機，其超純水水質水質應該超過或達到GB以及ASTM、CAP、CLSI的一級水標準；能夠提供通過各種標準所需的3Q認證服務；可以配合前端的純水機使用。樂楓提供的Direct-Pure EDI（或Direct-Pure RO）與PURIST的組合套裝可完全滿足HPLC檢測所需。

通常試液上樣前需要過濾，除掉試液內的顆粒及微生物，防止色譜柱堵塞、損壞泵等情況發生，保證儀器的操作性能及延長儀器使用壽命。樂楓提供PTFE、Nylon等多種針頭式過濾器，適用于各種有機相及水相的樣品過濾，保證用戶安全使用儀器。

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