ECL Plus 超敏發光液使用說明書

ECL Plus 超敏發光液使用說明書
貨號：PE0010
規格：25ml/100ml
保存：4℃密封避光保存有效期一年以上。25℃室溫放置數月不影響質量。
產品簡介：
ECL Plus 超敏發光液直接或間接檢測與辣根過氧化物酶HRP關聯的蛋白或核酸底物。這一獨特的發光底物系統是目前最靈敏的商業化熒光ECL檢測試劑，具有極高靈敏度和高信噪比，可檢測出10-100 fg的微量抗原；發光迅速，熒光可使X感光膠片感光達12小時以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測。同時該試劑允許使用更高的抗體稀釋倍數，（1：2000-1：10000），極其節省抗體。 用途：用于HRP標記抗體的Western Blot和HRP標記探針的核酸雜交。 安全性：無特殊毒性，按普通化學品處理。

使用方法：

1、常規電泳、轉膜、HRP標記抗體或核酸探針孵育、洗膜。注意用HRP標記IgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾心法。核酸雜交膜用HRP標記探針雜交，洗膜。

2、在洗滌膜上的HRP標記二抗的同時，新鮮配制發光工作液:分別取等體積的溶液A和B混合，放置使之升到室溫否則會減弱熒光強度。建議立即使用工作液，室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有減低。

3、用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜完全干燥。將膜完全浸入并與發光工作液（0.125ml發光工作液/cm2膜）充分接觸。室溫孵育3分鐘后立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導致曝光條帶異常。發光過程的本質是酶促反應，使用過少的發光工作液不利于反應進行，也會導致膜上條帶曝光不均勻和靈敏度明顯降低。為達節約目的可將膜減小但勿降低發光液用量。

4、用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發光工作液。但勿洗去發光液。

5、在X光膠片暗盒內面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來完全包裹雜交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發光工作液。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內，最好蛋白帶面向上。

6、在黑暗中放入X感光膠片，分別曝光不同的時間如數秒到數分鐘。顯影沖洗。

注意事項：

1、步驟1-5可在日光燈下操作；但發光液暴露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的潔凈。

2、長時間曝光或蛋白質過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶模糊。

3、發光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發光。強條帶發光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發光較弱，肉眼雖不可見但能使X膠片曝光。不能單憑肉眼觀察判斷條帶發光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續數小時并使X膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發光和曝光。

4、由于超敏發光液的高靈敏度，強烈推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗1：1000-1：4000，二抗1：2000-1：5000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導致失敗！

5、某些市售保鮮膜包裹印跡膜時會淬滅熒光，應選擇高質量保鮮膜，例如“克林萊”牌保鮮膜。 6、使用肉眼可見的預染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可幫助確定膠片上條帶的準確位置和大小。 7、NaN3能抑制HRP活性，回收二抗時應避免使用NaN3，如必需使用勿超過0.01%。

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