多色免疫組化染色試劑盒助力新生兒壞死性小腸結腸炎機制研究

新生兒壞死性小腸結腸炎（NEC）是早產兒常見的致命性腸道急癥，全球極低出生體重兒發病率約 7%，手術干預病例死亡率高達 80%，但其發病機制尚未完全明確。近期，《Immunity》（IF=26.3）發表“Bile acid receptor FXR promotes intestinal epithelial ferroptosis and subsequent ILC3 dysfunction in neonatal necrotizing enterocolitis”，揭示了膽汁酸受體 FXR 通過誘導腸上皮細胞（IECs）鐵死亡、抑制 3 型固有淋巴細胞（ILC3）功能加劇 NEC 的全新機制，為臨床治療提供了關鍵靶點。Absin 多色免疫組化染色試劑盒（abs50013）在該研究的組織分子定位分析中發揮了重要作用，助力科研團隊清晰解析 FXR - 鐵死亡 - ILC3 軸的病理調控網絡。

一、研究背景：NEC 治療困境與科學問題
NEC 的核心病理特征是腸上皮細胞異常死亡引發的腸道屏障破壞與過度炎癥，現有治療僅能通過禁食、抗生素等對癥干預，缺乏針對性靶點。此前研究提示：
1、早產兒腸道菌群失衡（如產短鏈脂肪酸（SCFAs）菌減少）與 NEC 密切相關，但菌群如何調控腸道免疫細胞功能尚不明確；
2、膽汁酸代謝紊亂可能參與 NEC 發病，腸上皮中膽汁酸受體 FXR 在 NEC 患者中高表達，但其下游作用機制未知；
3、鐵死亡（鐵依賴的脂質過氧化驅動型細胞死亡）在早產兒腸道中易發生，但與 NEC 的關聯及調控通路待驗證。

基于此，研究團隊提出核心科學問題：腸道菌群是否通過調控 FXR，介導腸上皮鐵死亡與 ILC3 功能異常，最終誘發 NEC？

二、“菌群 - FXR - 鐵死亡 - ILC3” 軸的層層解析
研究團隊采用 “臨床樣本驗證 - 動物模型干預 - 分子機制挖掘 - 治療靶點驗證” 的經典科研邏輯，分四步揭示 NEC 發病新機制，absin 試劑在關鍵實驗環節提供技術支持：

步驟 1：臨床樣本關聯分析 —— 鎖定 FXR 為 NEC 潛在標志物
研究首先檢測 46 例新生兒血漿及 6 例 NEC 患者腸組織，發現：
1）血漿中 FXR 靶基因產物 FGF19 與胎齡、出生體重呈負相關（R=-0.6512/-0.6373），與炎癥指標 CRP、腸屏障損傷標志物 I-FABP 正相關（R=0.5168/0.5904）；
2）NEC 患者腸上皮細胞（EpCAM+）中 FXR 及 FGF19 蛋白水平顯著升高（免疫熒光驗證，圖 1）。

關鍵試劑支撐：通過免疫熒光染色明確 FXR 在腸上皮的特異性表達，為后續機制研究聚焦 “腸上皮 FXR” 奠定基礎。

* 圖 2：NEC 患者與對照嬰兒小腸組織免疫熒光染色（EpCAM 標記腸上皮，FXR 為紅色，DAPI 染核）。左圖顯示 NEC 患者腸上皮 FXR 熒光強度顯著高于對照；右圖定量分析驗證差異（**p<0.001）。

步驟 2：動物模型驗證 —— 腸上皮 FXR 是 NEC 致病關鍵
為明確 FXR 的功能性作用，研究構建了：
NEC 小鼠模型：通過 “菌群定植 + 缺氧 + 低溫 + 配方喂養” 模擬臨床 NEC 病理環境；
腸上皮特異性 FXR 敲除小鼠（FxrΔIEC）：將 Fxrfl/fl 小鼠與 Villin-Cre 小鼠雜交，實現 IECs 中 FXR 特異性缺失。

實驗發現：
1）NEC 模型小鼠腸上皮 FXR 表達較正常小鼠升高 2.3 倍（流式細胞術驗證）；
2）FxrΔIEC 小鼠 NEC 發病率降低 58%，腸道炎癥評分（絨毛壞死、黏膜分離）顯著下降，生存率提升至 75%（vs 野生型小鼠 38%）；
3）補充 SCFAs（如丁酸鹽）可逆轉 NEC 模型小鼠腸上皮 FXR 的高表達，提示 “菌群 - SCFAs-FXR” 的調控關系。

步驟 3：分子機制挖掘 ——FXR 通過 ACSL4 驅動腸上皮鐵死亡
為解析 FXR 調控 NEC 的下游通路，研究結合多組學與功能實驗：
1、轉錄組測序（RNA-seq）：對比 FxrΔIEC 與野生型小鼠 IECs，發現差異基因富集于 “鐵死亡”“脂質代謝” 通路（如 ACSL4、GPX4 等）；
2、單細胞 RNA-seq（scRNA-seq）：進一步定位 FXR 主要在成熟腸上皮細胞（C1/C2 簇）中調控鐵死亡相關基因，FxrΔIEC 小鼠腸上皮中 PE-PUFAs（鐵死亡脂質底物）含量降低 40%；
3、分子機制驗證：ChIP 實驗證實 FXR 直接結合 ACSL4 啟動子區域（3 個結合位點），通過轉錄激活 ACSL4 促進脂質過氧化；使用 ACSL4 抑制劑 PRGL493 可完全阻斷 FXR 誘導的 IECs 鐵死亡。

步驟 4：病理效應延伸 —— 鐵死亡腸上皮通過 PEox 抑制 ILC3 功能
研究并未止步于 “FXR - 鐵死亡” 通路，進一步探索其對腸道免疫的影響：
1）FxrΔIEC 小鼠腸道中 ILC3 數量增加 62%，IL-22 分泌量提升 2.1 倍（ELISA 驗證），而 IL-22 可通過誘導 Reg3b/Reg3g 增強腸道屏障功能；
2）關鍵發現：鐵死亡 IECs 釋放的脂質過氧化物（如 PEox）可劑量依賴性抑制 ILC3 的 IL-22 分泌（圖 2），體外實驗顯示 10μM PEox 處理可使 IL-22+ILC3 比例下降 53%；

圖2 鐵死亡腸上皮細胞釋放氧化磷脂酰乙醇胺，從而抑制 ILC3s產生IL-22

3）absin 多重熒光免疫組化試劑盒（abs50013）應用：為明確 FXR、鐵死亡標志物（4-HNE）與腸上皮的共定位關系，研究采用 absin 多重熒光免疫組化試劑盒（abs50013），在同一張組織切片上同時檢測 EpCAM（腸上皮）、FXR（紅色）、4-HNE（綠色），清晰觀察到 NEC 患者腸上皮中 FXR 與 4-HNE 共表達水平顯著升高（圖 3），直接證明 FXR 陽性腸上皮細胞更易發生鐵死亡。

* 圖 3：abs50013 多色免疫組化染色結果（NEC 患者小腸組織）。EpCAM（白色，腸上皮）、FXR（紅色）、4-HNE（綠色，脂質過氧化標志物）、DAPI（藍色，細胞核）。黃色箭頭指示 FXR 與 4-HNE 共表達的腸上皮細胞，NEC 患者中此類細胞占比顯著高于對照（右圖定量，**p<0.001）。

Absin 多重熒光免疫組化試劑盒（abs50013）的核心優勢：

本研究為 NEC 發病機制提供了全新視角，也為臨床轉化奠定了基礎。在這一突破性成果中，Absin 多重熒光免疫組化試劑盒（abs50013）憑借其高特異性、多靶點同步檢測能力，成為解析 “FXR - 鐵死亡” 空間關聯的核心工具，助力科研團隊清晰呈現關鍵分子的細胞定位與功能關聯。未來，Absin 將繼續以高品質試劑與專業技術支持，賦能更多腸道疾病、新生兒醫學領域的科研探索。

參考文獻：
Bile acid receptor FXR promotes intestinal epithelial ferroptosis and subsequent ILC3 dysfunction in neonatal necrotizing enterocolitis. Immunity.  2025 Mar 1 .

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