從零掌握小鼠腦立體定位：實驗步驟與技巧全解析
一、實驗目的
-
掌握腦立體定位技術的基本原理與操作要點；
-
熟悉腦立體定位儀及腦圖譜的使用方法，為后續神經損毀、刺激、電生理及藥理研究打下基礎。
腦立體定位技術是一種廣泛應用于神經科學領域的精確定位方法。通過腦立體定位儀及腦圖譜的配合，可根據顱骨上的解剖標志（如前囟、后囟、耳道、眼眶或矢狀縫等）建立三維坐標體系，從而確定腦內特定結構的位置。
這種方法無需直視腦組織即可在皮層下進行藥物注射、電刺激、損毀或記錄等操作，是神經解剖學、神經生理學、神經藥理學及神經外科研究中不可或缺的實驗手段。
常見的實驗動物包括小鼠、大鼠、貓及部分鳥類等，只要具備完整的外耳道即可使用耳棒進行定位。根據腦圖譜提供的坐標數據，即可實現精確操作。
腦立體定位儀（如科月華誠牌腦立體定位儀）、MC-5微操作儀、常規顯微外科器械、鉆孔針、1ml注射器、生理鹽水、3%雙氧水、0.4%戊巴比妥鈉（現配現用）、75%酒精、碘伏、紗布、干棉球、實驗用小鼠。
四、實驗步驟
1. 儀器檢查與校準
在正式實驗前，應對腦立體定位儀進行全面校準：
-
檢查電極移動架三維滑尺是否保持垂直，利用三角板確認直角精度；
-
檢查各連接部件和螺絲是否松動，滑尺是否靈活；
-
確認主框兩臂平行、耳桿裝置對稱，小框與主框保持水平；
-
將耳桿前后滑動，確保刻度一致，尖端相互對準；
-
取下耳桿后安裝電極移動架，反復校準電極尖端與耳桿中心點位置，確保三個滑尺讀數一致；
-
最后用水平儀調整前后、左右滑道水平，保證定位基準面準確。
小鼠腦定位常用兩種方式：
（1）耳間線定位法：
將兩耳棒尖端在儀器滑道中相接，確保讀數一致并固定。以耳棒中心點為A點（耳間線中心），記下坐標。再將定位針移動至門齒鉤上方接觸其平面，設定為H0（水平原點）。此時前囟與后囟基本在同一水平面上。
（2）顱骨標志定位法：
以前囟為原點（前后方向0點），向前為正，向后為負，其余方向坐標參照耳間線法確定。
3. 實驗操作流程
（1）動物麻醉
選取體重20–30g的小鼠，稱重后按體重計算劑量，用0.4%戊巴比妥鈉進行腹腔注射。注射過程中動作要緩慢，密切觀察動物反應。
（2）固定動物
將小鼠門齒掛在上頜固定器上，插入一側耳棒至外耳道后固定，調整頭部使其居中，再插入另一側耳棒并鎖緊。最后壓下鼻環并固定，使動物頭部穩固不動。
（3）頭部處理與開顱
剪去頭頂部毛發，用碘伏和75%酒精交替消毒。沿矢狀縫縱向切開皮膚約3cm，輕輕剝離皮下組織。用雙氧水清除顱骨表面筋膜與血跡，暴露前囟、人字縫及矢狀縫。
（4）定位參照
將定位針垂直移動至矢狀縫上方，調整至前囟點，記錄坐標值作為基準。
（5）目標區域定位
以小鼠海馬為例：前囟后移2mm，矢狀縫旁開2.5mm，即為目標定位點。在該點鉆一微小圓孔，避免穿透硬腦膜。
（6）藥物注射
將1ml注射器吸入藥液，安裝于MC-5微操作儀上，使針尖緩慢下降2mm至海馬區，完成注射。注射后停針片刻，再緩慢拔出，防止藥液回流。
（7）定位驗證
實驗結束后，可通過紅色示蹤染料注射并制作腦切片，顯微鏡下觀察染料分布，驗證注射部位是否準確。
五、日常維護
-
操作儀器時輕拿輕放，防止碰撞損壞；
-
嚴格按照儀器使用范圍選擇實驗動物；
-
實驗后及時清潔儀器，保持滑道與螺紋的順暢；
-
定期檢查刻度與水平是否偏移，確保數據準確性。
六、實驗總結
腦立體定位技術以其高精度和可重復性，在神經科學研究中具有不可替代的地位。掌握該技術，不僅能實現腦區精確注射、損毀或電刺激，還能為藥物作用機制及腦功能研究提供重要工具。使用科月華誠腦立體定位儀，可在操作靈敏度、標尺精度及穩定性方面獲得更高實驗效率與結果可靠性。
