大鼠Bcl2相關(guān)髓細(xì)胞白血病序列1/P1NP/SEMA3A ELISA試劑盒說明書

檢測原理如下，如需詳細(xì)說明書請聯(lián)系我們索取 
試劑盒采用雙抗體夾心法原理：將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上，捕獲樣品及校準(zhǔn)品中待測物，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的酶標(biāo)二抗，結(jié)合形成“抗體-抗原-抗體-HRP”免疫復(fù)合物，加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍(lán)色，加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物含量呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中待測物的濃度。

包含的實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料
名 稱                                   組成成分
酶標(biāo)板                                預(yù)包被捕獲抗體的酶標(biāo)板
校準(zhǔn)品（10×）                   待測物 
酶標(biāo)抗體（100×）           100倍濃縮HRP酶標(biāo)記的檢測抗體
通用稀釋液（20×）          樣品/校準(zhǔn)品/酶標(biāo)抗體通用稀釋液
濃縮洗液（20×）             20倍濃縮洗液
顯色劑                              TMB、過氧化氫
終止液                              稀硫酸
如需單獨(dú)采購?fù)ㄓ眯徒M分，請?zhí)峁�對�?yīng)的組分名稱。

試劑的準(zhǔn)備及儲存
1×洗液的配制：濃縮洗液（20×）如有晶體析出，需在37℃下加熱至晶體全部溶解后使用。用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL濃縮洗滌液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。
1×通用稀釋液的配制：用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL的20×濃縮通用稀釋液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。
1×酶標(biāo)抗體工作液的配制：100×酶標(biāo)抗體用“1×通用稀釋液”按1:100倍稀釋，例如：10uL的（100×）酶標(biāo)抗體加入990uL的“1×通用稀釋液”，混合均勻。配制好的1×酶標(biāo)抗體工作液可以在2~8℃保存8h。
· 工作校準(zhǔn)品的配制：校準(zhǔn)品開封前應(yīng)離心30秒，確保所有校準(zhǔn)品集中于底部；
  準(zhǔn)備7個離心管，將10×校準(zhǔn)品按需吸取一定量用“1×通用稀釋液”稀釋10倍配制成校準(zhǔn)品S1。例：50uL的10×校準(zhǔn)品+450uL的“1×通用稀釋液”，制備得到500μL的S1濃度校準(zhǔn)品。在隨后的6個離心管中分別加入250μL的“1×通用稀釋液”，在這6個試管中（S2~S7）將S1校準(zhǔn)品依次倍比稀釋6個梯度至S7，共配制7個濃度的校準(zhǔn)品，依次為：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如隨貨說明書中圖所示，“1×通用稀釋液”作為零濃度校準(zhǔn)品S0，共8支校準(zhǔn)品。 

實(shí)驗(yàn)步驟
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右，也可置于37℃溫箱快速回溫至室溫。
注意：酶標(biāo)板未恢復(fù)室溫前，請勿開封。
編號    檢測試驗(yàn)需設(shè)置校準(zhǔn)品孔、樣品孔，合理規(guī)劃各樣本的排布。
稀釋加樣    校準(zhǔn)品孔：每孔加入校準(zhǔn)品100uL，（S0-S7，共8個濃度）。
樣品孔：每孔加入樣品稀釋液80uL，再加入樣品20uL。*
測細(xì)胞：每孔加入細(xì)胞上清100uL。
溫育    蓋上封板膜，在37℃下孵育60分鐘
洗板    洗板3次，最后一次洗板后倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍去殘液。
加酶    每孔加入100μL酶標(biāo)抗體工作液。
溫育    蓋上封板膜，在37℃下孵育60分鐘。
洗板    洗板5次，最后一次洗板后倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍去殘液。
顯色    每孔加入顯色劑100uL，37℃避光顯色15分鐘。
終止    每孔加終止液 50uL。
測定    使用酶標(biāo)儀在450nm檢測波長及620~690nm參比波長條件下測定吸光度值，如果沒有參比波長則僅選擇450nm波長進(jìn)行檢測。如果最高濃度校準(zhǔn)品OD值過高，應(yīng)立即在405/630nm雙波長條件下檢測。
* 樣品稀釋液50uL，加樣品50uL樣品稀釋倍數(shù)為2倍。
* 樣品稀釋液80uL，加樣品20uL，則稀釋倍數(shù)為5倍。
* 如樣本珍貴量少，可適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳稀釋倍數(shù)。

結(jié)果計(jì)算
雙波長檢測結(jié)果無需進(jìn)行調(diào)0，可直接進(jìn)行標(biāo)曲擬合及結(jié)果計(jì)算。
以下曲線擬合方式均可使用，選擇擬合后r值最佳的擬合方式進(jìn)行結(jié)果計(jì)算。
l 四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合：以濃度值為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)；
l 多項(xiàng)式曲線擬合：2次多項(xiàng)式、3次多項(xiàng)式；
l 雙對數(shù)直線擬合：以濃度值取對數(shù)，吸光度值取對數(shù)后，進(jìn)行直線擬合；
l 點(diǎn)對點(diǎn)擬合：各相鄰點(diǎn)之間分別單獨(dú)進(jìn)行線性擬合，分段計(jì)算；
推薦使用專業(yè)化軟件進(jìn)行結(jié)果擬合和計(jì)算，如ELISACALC、SPSS、Graphpad Prism等。
**最終樣本濃度應(yīng)乘上樣本的稀釋倍數(shù)。
曲線擬合方式示例圖，以下數(shù)據(jù)和曲線僅供示例，與本試劑盒測定結(jié)果無關(guān)。

檢測的局限性
樣本濃度超出檢測范圍上限時，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)后再次檢測，計(jì)算結(jié)果應(yīng)當(dāng)乘上稀釋倍數(shù)。樣本濃度低于LOQ定量限時，檢測結(jié)果無法進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

產(chǎn)品性能指標(biāo)
以下結(jié)果基于校準(zhǔn)品的濃度值實(shí)驗(yàn)得出，未納入基質(zhì)效應(yīng)等其他因素的潛在影響。
精密度：板內(nèi)精密度CV＜10%（N=20），板間精密度CV＜15%（N=20）。
特異性（Analytical specificity）：其他相關(guān)因子在稀釋緩沖液中測定，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。