PALL超濾方案在蛋白濃縮應用中的選擇指南

蛋白濃縮小幫手，PALL超濾方案選擇指南

一提起蛋白質濃縮、更換緩沖液，我們都會想起超濾。這是一種我們都很熟悉的膜分離技術。它可用來分離溶液中極小的顆粒和溶解的分子。這種方法的最大特點是操作簡便，只需要濃縮離心管和離心機，即可圓滿完成我們的任務。

與層析、透析等方法相比，超濾對被處理的分子更加溫和。它不需要有機萃取，就不會導致蛋白變性。這種方法非常高效，可同時濃縮和純化分子。操作可在低溫（比如冷庫）下進行。另外，快速、便宜，也是許多人青睞它的原因。

濃縮離心管的操作很簡單。選擇適當的濃縮離心管，加入待處理的樣本，按照離心管的指示進行離心操作，最后回收截留的樣本。在離心力的作用下，溶液中的小分子溶質和溶劑透過超濾膜，被收集在濾過液收集瓶中，而大分子溶質被超濾膜截留在濃縮離心管中。這種分離的主要依據是分子大小，但分子形狀和電荷等其他因素也會有影響。

一般來說，超濾的回收率可達90%以上。樣本損失大多是由于濾膜表面和容器表面的非特異性吸附引起的。因此，選擇口碑好、高品質的濃縮離心管非常重要。PALL作為全球領先的過濾企業，提供了多種濃縮離心管，可對50 μl到60 ml的樣本進行高效的濃縮和脫鹽。它配備了Omega（改良的聚醚砜）膜，確保低的非特異性吸附和高的回收率。當然，這個的前提是你選對了濃縮離心管。

▍按體積

PALL實驗室提供了4個系列的濃縮離心管，適合處理不同體積的樣本。你可以根據你的樣本量來選擇。不過，如果樣本濃度低體積大，可以選擇較小容積的濃縮離心管多次重復加樣離心。

▍選擇適當的截留分子量（MWCO）

一旦樣本體積確定，下一步就是選擇適當的MWCO。對于蛋白質而言，建議所選濾膜的MWCO是欲截留分子大小的1/6-1/3。通常，截留孔徑越小，流速越慢，但截留比例更大。因此，如果流速是主要的考慮因素，建議選擇MWCO為1/3的濾膜；如果重點考慮截留比例，那么最好選擇更致密的膜。

友情提示一下，超濾膜對分子的截留是由多個因素決定的。在截留分子量之外，你還有必要考慮分子形狀、電荷、樣本濃度、樣本組成及操作條件。也許，線性的DNA分子溜走了，而球狀的分子卻被保留下來。總之，根據下表來選擇MWCO就基本沒錯了。為了防止大家拿錯管子，PALL實驗室還貼心地將不同MWCO的濃縮離心管設置成不同的顏色，以方便識別。

核酸應用的MWCO選擇

蛋白應用的MWCO選擇

病毒應用的MWCO選擇

對于1L樣品處理，切向流超濾系統會助力您的研究。PALL實驗室Minimate EVO 切向流超濾系統是設計用來進行高度可靠的1L樣品換液或者濃縮。新的切向流超濾系統增加了下游的壓力表來使計算跨膜壓力成為可能, 允許更大的用戶控制和驗證. 除此之外，Minimate EVO 切向流系統升級了磁力攪拌功能，更加堅固的管路和連接，更加容易安裝和運行。

▍濃縮

這是大家都很熟悉的應用。超濾可很方便地濃縮經過稀釋的蛋白質或DNA/RNA樣本。它很溫和，不會打斷長達100 kb的DNA，也不會導致蛋白酶活的損失，同時也很高效，回收率通常高于90%。通過膜預處理（鈍化）可以提高低濃度蛋白的濃縮效率。稀釋蛋白質溶液的濃縮是一種廣泛使用的應用。 稀釋 (<10 µg/mL) 蛋白質溶液的回收率通常不是定量的。在濃縮稀蛋白質溶液之前對設備進行預處理（鈍化）可以提高回收率。

▍脫鹽和緩沖液交換

超濾帶來了一種方便而高效的方法，可去除和交換溶液中的鹽、去除變性劑、分離復合分子、去除低分子量組分，或者快速改變離子或者pH環境。比如在用兩種或兩種以上的限制性內切酶進行酶切時，有時找不到通用的酶切緩沖液，就可以借助濃縮離心管，更換緩沖液。

▍組分分離

當然，超濾無法完全分離兩種分子量接近的分子。為了有效分離，待分離分子的分子量至少要相差一個數量級（10X）。對于PCR產物的純化和回收，超濾就很適合。PCR反應混合物里含有多種鹽、游離的核酸、甘油、蛋白和引物，因此大多數的下游應用都要求對PCR產物進行某種純化。超濾的方法快速，操作少，產率高，也不損傷DNA。

最后提醒一下，對于高通量超濾應用，PALL實驗室還提供各種微孔濾板助力您的研究。為您的科研保駕護航。歡迎聯系PALL實驗室索取免費樣品和下載技術資料。