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          臨床免疫檢驗中的干擾因素主要有哪些?

          瀏覽次數(shù):736 發(fā)布日期:2019-9-5  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負
          臨床免疫檢驗中的干擾因素主要有哪些
          干擾物是臨床實驗室檢測誤差的一個很重要的來源,它們在某種程度上對病人來說表現(xiàn)為是一種危害。常規(guī)工作中精密度通過室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)控,準確性通過與參考物質(zhì)作比較試驗進行驗證,但實驗室不能很容易的廣義上干擾物是導(dǎo)致分析物濃度或催化活力出現(xiàn)偏移的物質(zhì),如免疫法干擾常由交叉反應(yīng)所致,因此,干擾物通過干擾作用來影響分析特異性,從干擾物來源,干擾作用分為內(nèi)源性和外源性干擾。
          一、內(nèi)源性干擾物質(zhì)
          1、類風濕因子(Rheumatoidfactors,RF)
          類風濕因子(rheumatoid factor,RF)是一種抗人或動物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體,是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。RF最初由Rose等(1984年)在類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)患者血清中發(fā)現(xiàn)。RA患者體內(nèi)有產(chǎn)生RF的B細胞克隆,在變性IgG或EB病毒的直接作用下可大量合成RF。RF主要為IgM類自身抗體,但也有IgG類、IgA類、IgD類和IgE類。
          人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標記二抗的Fc段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽性。
          類風濕因子干擾的排除
          (1)用F(ab)替代完整的IgG。
          (2)標本用聯(lián)有熱變性(63°C,10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效)。
          (3)檢測抗原時,可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。
          2、嗜異性抗體
          嗜異性抗體(Id)是由低純度抗原引起的,又稱之為對非特異性抗原產(chǎn)生的抗體應(yīng)答。
          天然的嗜異性抗體(IgG)可分為兩類:
          一類(85%的假陽性或假增高由其引起)可結(jié)合于山羊、小鼠、大鼠、馬和牛IgG的Fab區(qū)域,但不與兔IgG的Fab區(qū)結(jié)合。
          另一類(15%的假陽性或假增高由其引起)可結(jié)合于小鼠、馬、牛和兔IgG的FC區(qū)表位,但不與山羊和大鼠IgG的FC區(qū)表位結(jié)合。嗜異性抗體可通過交聯(lián)固相和酶標的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽性或假增高反應(yīng)。
          其也可造成假陰性或假降低的結(jié)果。
          嗜異性抗體干擾的排除
          使用特異的兔F(ab’)2片段作為固相或酶標抗體。
          在標本或標本稀釋液中加入過量的動物Ig,封閉可能存在的嗜異性抗體。但加入量不足或亞類不同時無效。
          使用靶特異的非Ig親和蛋白(Affibody)替代固相或酶標抗體之一。采用噬菌體展示技術(shù)展示來自單個金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)聯(lián)合文庫的人IgA結(jié)合親和蛋白,用于IgA的測定,不受異嗜性抗體的影響。
          使用特異的雞抗體作為固相和測定抗體。
          3、人抗動物(如小鼠、免、羊等)抗體
          人抗小鼠抗體(human anti-mouse antibodies,HAMA):抗鼠抗體對使用鼠源性單克隆抗體的免疫測定,可產(chǎn)生假陽性(定量檢測假增高)或假陰性(定量假降低)結(jié)果。
          干擾排除的方法
          使用特異的抗體F(ab’)2片段作為固相或測定酶標抗體。
          在標本或標本稀釋液中加入過量的鼠Ig,封閉可能存在的抗鼠抗體。
          使用特異的雞抗體IgG作為固相和測定抗體。雞IgG不與人抗鼠抗體反應(yīng)。因而,用其作為固相或酶標抗體不會出現(xiàn)假增高或假降低結(jié)果。
          4、自身抗體
          自身抗體如抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素、抗甲狀腺激素抗體等,能與其相應(yīng)靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在免疫測定方法中可干擾相應(yīng)抗原抗體的測定。
          自身抗體干擾排除的方法
          測定前需用理化方法將其解離后再測定。
          5、補體
          補體(complement,C)是存在于正常人和動物血清與組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)。早在19世紀末Bordet即證實,新鮮血液中含有一種不耐熱的成分,可輔助和補充特異性抗體,介導(dǎo)免疫溶菌、溶血作用,故稱為補體。補體是由30余種可溶性蛋白、膜結(jié)合性蛋白和補體受體組成的多分子系統(tǒng),故稱為補體系統(tǒng)(complement system)。根據(jù)補體系統(tǒng)各成分的生物學(xué)功能,可將其分為補體固有成分、補體調(diào)控成分和補體受體(CR)。

          ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其Fc段的C1q分子結(jié)合位點被暴露出來,使C1q可以將二者連接起來,從而造成假陽性。
          補體干擾的排除
          1、用EDTA稀釋標本。
          2、用53°C,10min加熱血清使C1q滅活。
          6、溶菌酶
          溶菌酶(lysozyme)又稱胞壁質(zhì)酶(muramidase)或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase),是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵,使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,導(dǎo)致細胞壁破裂內(nèi)容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結(jié)合,與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽,使病毒失活。因此,該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
          溶菌酶可與等電點較低的蛋白有強的結(jié)合能力。免疫球蛋白等電點約為5,因此,在雙抗體夾心法測定中,溶菌酶可在包被的IgG和酶標的IgG間形成橋接,從而導(dǎo)致假陽性或假增高結(jié)果。
          排除方法
          為保證免疫測定的可靠性,有必要從標本中去除溶菌酶或?qū)⑵浞忾],Cu2+離子和卵白蛋白可有效地封閉溶菌酶,防止其聯(lián)接IgG。
          7、抗試劑成份的抗體
          抗鏈霉親合素抗體(anti-streptavidin antibodies):鏈霉親合素(streptavidin)是由Streptomyces avidinni產(chǎn)生的,機體為什么會出現(xiàn)抗鏈霉親合素抗體的原因目前尚不清楚。
          抗釕抗體(antiruthenium antibodies)。
          8、被動獲得的外源抗體或抗原
          靜脈輸注免疫球蛋白獲得抗病原體的抗體(如抗梅毒抗體、抗-HCV、抗-HBs等)];新生兒獲得的來自母體的特異IgG;新生兒獲得的來自乙肝“大三陽”母親的HBeAg。
          9、交叉反應(yīng)(cross reaction)
          交叉反應(yīng)是兩種來源不同的抗原,彼此之間可以有相同的抗原決定簇,由此決定簇刺激機體產(chǎn)生的抗體不僅可分別與其自身表面的相應(yīng)抗原表位結(jié)合,而且還能與另一種抗原的相同表位結(jié)合發(fā)生反應(yīng),稱為交叉反應(yīng)。
          交叉反應(yīng)現(xiàn)象的形成可能與下列因素有關(guān):
          1、共同抗原,不同生物體的某些生物大分子具有相同的抗原結(jié)構(gòu);
          2、共同表位,不同的生物大分子的某些片段(肽段)具有相同的表位;
          3、相似表位,不同的生物大分子,其表位的部分空間構(gòu)象十分類似,可以和同一種抗體的互補決定區(qū)相契合。
          激素、小分子半抗原等易受到交叉反應(yīng)影響。
          10、生物素(biotin)
          生物素又被稱為維生素B7或維生素H,是一種水溶性B族維生素。生物素的缺乏主要會損害皮膚、粘膜和神經(jīng)系統(tǒng),在普通人群中長期的生物素缺乏可能導(dǎo)致毛發(fā)、指甲、皮膚的損害。
          生物素-親合素系統(tǒng)是上世紀70年代末發(fā)展起來的一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)。現(xiàn)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域。在體外診斷的實際應(yīng)用中更是具有巨大的優(yōu)越性,生物素可與幾乎所有生物大分子結(jié)合,親和力高,結(jié)合穩(wěn)定,靈敏度高,具有多級放大作用。
          生物素干擾存在于使用生物素-親和素系統(tǒng)或生物素-抗生物素系統(tǒng)的檢測中。與儀器廠家、儀器型號、發(fā)光底物無關(guān),同一廠家不同項目包被方式也可能不同。生物素對化學(xué)發(fā)光產(chǎn)生干擾需要一定的濃度,不同項目/試劑抗生物素干擾的能力不同。生物素干擾可能產(chǎn)生假陽性,也可能產(chǎn)生假陰性。一般來說,夾心法產(chǎn)生假陰性,競爭法產(chǎn)生假陽性。
          使用了生物素-鏈霉親合素(streptavidin-biotin)系統(tǒng)的檢測系統(tǒng):
          Access,DxI and DxC (Beckman Coulter);
          Elecsys,Cobas and Modular platforms (Roche Diagnostics);
          Isys platforms (Immuno Diagnostic System);
          Ortho Vitros platform (Ortho Clinical Diagnostics);
          Dimension Vista,Exl,Immulite platforms (Siemens Healthineers)
          二、外源性干擾物質(zhì)
          1、溶血
          溶血(Hemolysis)紅細胞破裂,血紅蛋白逸出稱紅細胞溶解,簡稱溶血。可由多種理化因素和毒素引起。在體外,如低滲溶液、機械性強力振蕩、突然低溫冷凍(-20℃~-25℃)或突然化凍、過酸或過堿,以及酒精、乙醚、皂堿、膽堿鹽等均可引起溶血。

          標本溶血時可釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA測定中,會導(dǎo)致非特異性顯色,干擾測定結(jié)果。
          解決方法標本采集和處理時必須注意避免溶血。
          2、標本被細菌污染
          細菌菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,在ELISA試驗中可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
          3、標本保存時間過長
          部分項目因穩(wěn)定性時間較短,需嚴格注意標本保存時間。
          4、標本凝固不全
          血液采集后,如收集管中無促凝劑和抗凝劑,則血液通常在半小時后開始凝固,18~24h完全凝固。日常檢驗中,常在血液還未開始凝固時即離心分離血清,此時因血液沒有完全凝固,離出的“血清”并非為完全的血清,其中仍殘留部分纖維蛋白原,易形成干擾,造成假陽性。
          解決方法
          血液標本采集后,應(yīng)使其充分凝固后再分離血清,或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當?shù)拇倌齽?br /> 5、樣本離心時間
          個別標本由于離心制備不徹底,造成假陽性結(jié)果,如果忽略掉就會給臨床造成誤診,引起不必要的醫(yī)療糾紛。故建議檢驗人員若遇到疑似陽性標本,最好延長離心時間,重復(fù)測定,可以降低假陽性率,增加檢驗結(jié)果的準確性。
          結(jié) 論
          干擾物質(zhì)影響分析特異性,檢驗工作者在日常工作中需格外注意,必須減少樣本中的干擾物質(zhì),避免對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。
          檢測干擾物質(zhì)引起地誤差。
          CTA提供以下診斷試劑研發(fā)相關(guān)原料:
          產(chǎn)品名稱 貨號 用途 備注
          阻斷劑 CTA-9020 消除某些檢測樣本假陽性結(jié)果  
          酶專用穩(wěn)定劑 CTA-9021 有效保護酶標抗體中酶的生物活性  
          磁微粒化學(xué)發(fā)光磁珠專用穩(wěn)定劑 CTA-9022 管式發(fā)光中,保護磁珠標記的抗原或抗體的生物活性  
          標準品專用穩(wěn)定劑 CTA-9023 用于標準品的穩(wěn)定  
          蛋白穩(wěn)定劑(干粉) CTA-9024 廣泛用于免疫診斷試劑中,有效保護抗原,抗體,標準品,質(zhì)控品及酶的生物活性  
          蛋白穩(wěn)定劑(100*,液體) CTA-9025 液體即用型,操作方便,按母液比例稀釋即用。  
          標準品專用稀釋液(human sera) CTA-9026 特殊項目標準品稀釋液,有效穩(wěn)定目的物質(zhì)及降低本底。  
           
          如感興趣,請聯(lián)系我們,敬請關(guān)注!
           
          發(fā)布者:鄭州賽圖康生物科技有限公司
          聯(lián)系電話:037165366768
          E-mail:763772508@qq.com

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