人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體酶聯免疫分析試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠ-Ab)表達。

人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體酶聯免疫分析試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠ-Ab)表達。用純化的人單純皰疹病毒Ⅰ型抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中單純皰疹病毒Ⅰ型抗體相結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的單純皰疹病毒Ⅰ型抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠ-Ab)的存在與否。

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

1.         編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

 

 

2.         加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.     測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠ-Ab)陰性

  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠ-Ab)陽性

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1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月