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| 銷售商： 上海谷研實業有限公司 | 查看該公司所有產品 >> |
產品概述
本試劑盒用于快速、特異性檢測轉基因植物（如抗病毒木瓜等）中整合的番木瓜環斑病毒（PRSV）基因片段。采用優化的PCR體系，可精準擴增PRSV外殼蛋白基因（cp）、復制酶基因等靶序列，適用于種子、葉片、果實等樣本的轉基因成分篩查與鑒定。
檢測原理
DNA提取：試劑盒含植物基因組DNA快速提取組件。
PCR擴增：
特異性引物對靶向PRSV基因保守區域（如NCBI登錄號中的目標序列）。
內參基因（如Le基因/植物葉綠體基因） 作為擴增陽性對照，避免假陰性。
結果分析：通過凝膠電泳或熒光PCR儀判斷目標條帶（預設大小）是否存在。
試劑盒組成（50次測試）
| DNA提取緩沖液 | 15 mL | 4℃ |
|PCR預混液（含dNTPs、Mg²⁺、Taq酶） | 1.0 mL | -20℃ |
| PRSV基因特異性引物混合液（正向+反向） | 100 μL | -20℃ |
| 植物內參基因引物混合液 | 100 μL | -20℃ |
| 陽性對照DNA（含PRSV基因片段） | 50 μL | -20℃ |
| 超純水（核酸級） | 1.5 mL | 室溫 |
| DNA吸附柱 & 收集管 | 50套 | 室溫 |
| —— | 可選：核酸電泳上樣緩沖液 | 1 mL | 4℃ |
操作步驟
DNA提取（快速柱提法）
取100 mg植物組織，液氮研磨。
加400 μL Buffer A，渦旋混勻。
13,000 rpm離心5 min，取上清。
上清轉移至吸附柱，離心棄濾液。
用700 μL Wash Buffer清洗兩次。
空柱離心2 min除乙醇。
加50 μL Elution Buffer洗脫DNA。
PCR反應體系（25 μL）
| 組分 | 體積 |
| PCR預混液 (Component B) | 12.5 μL |
| PRSV引物混合液 (Component C) | 1.0 μL |
| 內參基因引物 (Component D) | 1.0 μL |
| 模板DNA | 2.0 μL |
| 超純水 (Component F) | 補足至25 μL |
PCR循環程序（常規Taq酶）
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
| 預變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 30 sec | 35 |
| 退火 | [需優化] 56-60℃ | 30 sec | 35 |
| 延伸 | 72℃ | 45 sec | 35 |
| 終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
| 保存 | 4℃ | ∞ | - |
結果判讀
凝膠電泳法：
取8 μL PCR產物 + 2 μL 上樣緩沖液，1-2%瓊脂糖凝膠電泳（120 V，30 min）。
預期條帶：
PRSV基因：XXX bp（根據引物設計，如 cp 基因約350 bp）
內參基因（如Le）：YYY bp（如植物通用基因500 bp）
陽性判定：
樣本同時出現PRSV條帶 + 內參條帶 → 含PRSV轉基因成分
僅內參條帶 → 無非轉基因成分
無條帶或僅PRSV條帶 → 實驗失敗（需復測）
注意事項
嚴格分區操作：DNA提取、PCR配制、擴增產物分析需在獨立區域進行，防止交叉污染。
陰性/陽性對照：每次實驗必須設置：
陽性對照（Component E）
陰性對照（非轉基因植物DNA）
空白對照（水模板）
引物特異性：本試劑盒僅檢測PRSV特定基因型，其他病毒株（可能無交叉反應。
保存條件：避光分裝保存，避免反復凍融引物。
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