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| 銷售商： 上海谷研實業(yè)有限公司 | 查看該公司所有產(chǎn)品 >> |
產(chǎn)品用途
本試劑盒采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)，通過特異性擴增EPSPS基因片段，定性檢測植物樣本中是否含有轉(zhuǎn)基因EPSPS成分，適用于大豆、玉米、棉花等作物的快速篩查。
檢測原理
基于DNA水平的雙鏈特異性擴增：
通過裂解液提取樣本DNA；
設(shè)計EPSPS基因特異性引物進行PCR擴增；
電泳分析擴增產(chǎn)物，通過條帶大小判定轉(zhuǎn)基因成分。
試劑盒組成
PCR預(yù)混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液
EPSPS引物混合液（上下游引物）
陽性對照（含EPSPS基因片段）
陰性對照（非轉(zhuǎn)基因植物DNA）
DNA提取試劑（裂解液、蛋白酶K等）
電泳上樣緩沖液
操作步驟
樣本處理
取100mg植物組織，使用DNA提取試劑盒提取基因組DNA；
測定DNA濃度并稀釋至50ng/μL。
PCR反應(yīng)體系配制（25μL體系）
| 組分 | 體積（μL） |
| PCR預(yù)混液 | 12.5 |
| EPSPS引物混合液 | 2.0 |
| 模板DNA | 2.0 |
| ddH₂O | 8.5 |
PCR擴增程序
預(yù)變性：95℃ 5min；
35個循環(huán)：95℃ 30s → 58℃ 30s → 72℃ 45s；
終延伸：72℃ 5min。
結(jié)果分析
取5μL產(chǎn)物進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳；
陽性樣本應(yīng)在預(yù)期位置（如300bp）出現(xiàn)特異性條帶。
注意事項
實驗安全
佩戴手套操作，避免DNA酶污染；
廢棄反應(yīng)液需經(jīng)消毒處理。
質(zhì)量控制
每次實驗需同時運行陽性和陰性對照；
若陽性對照無條帶，需排查試劑或儀器問題。
儲存條件
引物和預(yù)混液需-20℃保存，避免反復(fù)凍融；
提取試劑室溫避光保存。
局限性
僅適用于已知EPSPS基因序列的轉(zhuǎn)基因品系；
樣本降解或抑制劑可能導(dǎo)致假陰性。
性能參數(shù)
靈敏度：可檢測≥0.1%的轉(zhuǎn)基因成分；
特異性：與常見非轉(zhuǎn)基因作物無交叉反應(yīng)；
保質(zhì)期：12個月（-20℃保存）。
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