產(chǎn)品基本信息
規(guī)格:50次檢測(cè)(50T)
適用樣本:植物組織、食品及飼料中轉(zhuǎn)基因成分(如Cry1A(b/c)基因片段)
檢出限:0.1%(靈敏度)
特點(diǎn):快速、高特異性、操作簡(jiǎn)便,適用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。
試劑盒組成
主要組分:
熒光PCR預(yù)混液(含Cry1A特異性引物及探針)
陰性對(duì)照(NG-P)
陽(yáng)性對(duì)照(PG-Cry1A-P)
核酸提取輔助試劑(如溶解液、稀釋液等)
需自備耗材:
滅菌離心管(1.5 mL/2.0 mL)、PCR八聯(lián)管
移液器及滅菌吸頭(10 μL、100 μL、1000 μL)
冰盒、渦旋混勻器、離心機(jī)、金屬浴
操作步驟
樣本處理:
使用研磨器具均質(zhì)化樣本,提取DNA(建議采用CTAB法或商業(yè)提取試劑盒)。
反應(yīng)體系配制(以20 μL為例):
預(yù)混液:15 μL
DNA模板:2 μL(建議濃度≥10 ng/μL)
陰性/陽(yáng)性對(duì)照:分別加入對(duì)應(yīng)孔位。
PCR擴(kuò)增程序:
預(yù)變性:95℃ 5分鐘
循環(huán)階段(40 cycles):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號(hào))
結(jié)果判讀:
陽(yáng)性:Ct值≤35,且擴(kuò)增曲線呈典型S型;
陰性:無(wú)擴(kuò)增曲線或Ct值>38。
注意事項(xiàng)
防污染措施:
分區(qū)域操作(樣本處理、體系配制、PCR擴(kuò)增),避免氣溶膠污染。
操作全程佩戴手套,避免口腔飛沫污染。
試劑使用:
預(yù)混液使用前需充分融化并輕柔混勻(禁止劇烈振蕩)。
反應(yīng)體系配制后需立即上機(jī)檢測(cè),防止引物二聚體形成。
質(zhì)量控制:
每批次實(shí)驗(yàn)需包含陰/陽(yáng)性對(duì)照,確保試劑有效性。
若陽(yáng)性對(duì)照未檢出,需排查儀器或操作問(wèn)題。
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