產品簡介
本試劑盒基于實時熒光PCR技術,針對轉基因作物(如玉米、大豆、棉花等)及加工產品中的Bt基因特異性核酸片段進行定性檢測,檢出限為0.1%(w/w)。適用于實驗室檢測、食品安全監管及進出口檢驗等領域。
產品組成
主反應液(Bt-I):含引物、探針及PCR緩沖體系
陰性對照(NG-I):無靶標DNA的緩沖液
陽性對照(PG-Bt-I):含Bt基因片段的標準品
酶混合液(E-I):Taq DNA聚合酶等
適用儀器
熒光PCR儀:ABI 7500、CFX 96、LightCycler 480、LineGene 9600等
恒溫熒光檢測儀(可選):Dhelix系列、ESE Tube Scanner等
自備耗材與儀器
滅菌離心管(1.5 mL/2.0 mL)、PCR八聯管
移液器(0.5-10 μL、10-100 μL、100-1000 μL)及滅菌吸頭
離心機、渦旋混勻器、金屬浴或水浴鍋
樣品前處理設備:均質機、研磨器具、電子天平等
操作步驟
樣品制備:研磨樣本并提取DNA,濃度建議≥10 ng/μL。
反應體系配制(冰上操作):
主反應液 18 μL + 模板DNA 2 μL(陰性/陽性對照替換為對應試劑)。
PCR程序設置:
預變性:95℃ 5 min → 擴增:95℃ 10 s,60℃ 30 s(40循環,熒光采集)。
結果判讀:
Ct值≤35且擴增曲線呈S型為陽性;無擴增曲線為陰性。
注意事項
分區操作:試劑配制、樣本處理、擴增區需嚴格分離,避免氣溶膠污染。
防污染措施:使用一次性耗材,實驗后及時清理擴增產物。
質量控制:每批次檢測需包含陰/陽性對照,異常結果需復測。
性能參數
特異性:與常見轉基因標記基因(如BAR、PAT)無交叉反應。
靈敏度:可檢測≥0.1%的轉基因成分。
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